2025/03/27 更新

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セキトウ タカユキ
関藤 孝之
Sekito Takayuki
所属
大学院農学研究科 生命機能学専攻 教授
職名
教授
連絡先
メールアドレス
外部リンク

学位

  • 博士(理学) ( 広島大学 )

研究キーワード

  • 液胞

  • オートファジー

  • 出芽酵母

  • トランスポーター

研究分野

  • ライフサイエンス / 細胞生物学

学歴

  • 広島大学

    - 1996年

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  • 広島大学   理学研究科

    - 1996年

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    国名: 日本国

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経歴

  • 愛媛大学   大学院農学研究科   教授

    2016年12月 - 現在

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  • 愛媛大学   大学院農学研究科   准教授

    2014年8月 - 2016年11月

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  • 愛媛大学   農学部   助教

    2007年4月 - 2014年7月

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  • 基礎生物学研究所   細胞内エネルギー変換機構研究部門   特別協力研究員

    2005年4月 - 2007年3月

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  • 基礎生物学研究所   細胞内エネルギー変換機構研究部門   日本学術振興会特別研究員

    2002年4月 - 2005年3月

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  • 基礎生物学研究所   細胞内エネルギー変換機構研究部門   非常勤研究員

    2001年2月 - 2002年3月

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  • テキサス大学サウスウエスタンメディカルセンター   Department of Oncology   博士研究員

    1997年1月 - 2001年1月

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  • 広島大学   理学部   日本学術振興会特別研究員

    1996年4月 - 1996年12月

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所属学協会

委員歴

  • 日本生化学会   評議員  

    2017年 - 現在   

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    団体区分:学協会

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  • 日本農芸化学会中四国支部   参与  

    2016年 - 現在   

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    団体区分:学協会

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論文

  • A vacuolar membrane protein Vsb1p contributes to the vacuolar compartmentalization of basic amino acids in Schizosaccharomyces pombe. 国際誌

    Shota Ohnishi, Miyuki Kawano-Kawada, Yusuke Yamamoto, Koichi Akiyama, Takayuki Sekito

    Bioscience, biotechnology, and biochemistry   86 ( 6 )   763 - 769   2022年5月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Accumulation levels of Arg, Lys, and His in vacuoles of Schizosaccharomyces pombe cells were drastically decreased by the disruption of SPAC24H6.11c (vsb1+) gene identified by a homology search with the VSB1 gene of Saccharomyces cerevisiae. The Vsb1p fused with green fluorescent protein particularly localized at vacuolar membranes in S. pombe cells. Overexpression of vsb1+ markedly increased vacuolar levels of basic amino acids; however, overexpression of the vsb1D174A mutant did not affect the levels of these amino acids. These results suggest that the vsb1+ contributes to the accumulation of basic amino acids into the vacuoles of S. pombe, and the aspartate residue in the putative first transmembrane domain conserved among fungal homologs is crucial for the function of Vsb1p.

    DOI: 10.1093/bbb/zbac041

    PubMed

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  • Ygr125w/Vsb1-dependent accumulation of basic amino acids into vacuoles of Saccharomyces cerevisiae 査読 国際誌

    Miyuki Kawano-Kawada, Haruka Ichimura, Shota Ohnishi, Yusuke Yamamoto, Yumi Kawasaki, Takayuki Sekito

    Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry   85 ( 5 )   1157 - 1164   2021年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:Oxford University Press (OUP)  

    <title>ABSTRACT</title>
    The Ygr125w was previously identified as a vacuolar membrane protein by a proteomic analysis. We found that vacuolar levels of basic amino acids drastically decreased in ygr125wΔ cells. Since N- or C-terminally tagged Ygr125w was not functional, an expression plasmid of YGR125w with HA3-tag inserted in its N-terminal hydrophilic region was constructed. Introduction of this plasmid into ygr125w∆ cells restored the vacuolar levels of basic amino acids. We successfully detected the uptake activity of arginine by the vacuolar membrane vesicles depending on HA3-YGR125w expression. A conserved aspartate residue in the predicted first transmembrane helix (D223) was indispensable for the accumulation of basic amino acids. YGR125w has been recently reported as a gene involved in vacuolar storage of arginine; and it is designated as VSB1. Taken together, our findings indicate that Ygr125w/Vsb1 contributes to the uptake of arginine into vacuoles and vacuolar compartmentalization of basic amino acids.

    DOI: 10.1093/bbb/zbab015

    PubMed

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    その他リンク: http://academic.oup.com/bbb/article-pdf/85/5/1157/37329200/zbab015.pdf

  • The vacuolar amino acid transport system is a novel, direct target of GATA transcription factors 査読

    Akane Sato, Takumi Kimura, Kana Hondo, Miyuki Kawano-Kawada, Takayuki Sekito

    Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry   85 ( 3 )   587 - 599   2021年2月

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    掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

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  • Stm1 is a vacuolar PQ-loop protein involved in the transport of basic amino acids in Schizosaccharomyces pombe 査読 国際誌

    Miyuki Kawano-Kawada, Taisuke Ueda, Hikari Mori, Haruka Ichimura, Kaoru Takegawa, Takayuki Sekito

    Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes   1863 ( 2 )   183507 - 183507   2020年11月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:Elsevier BV  

    The stm1+ (SPAC17C9.10) gene of Schizosaccharomyces pombe is closely related to genes encoding vacuolar PQ-loop proteins, Ypq1, Ypq2, and Ypq3, of Saccharomyces cerevisiae. When stm1+ fused with GFP was expressed in fission or budding yeast, Stm1-GFP localized at the vacuolar membrane. Isolated vacuolar membrane vesicles from S. cerevisiae cells overexpressing stm1+ exhibited stm1+-dependent arginine and lysine uptake activity. Exchange activity of arginine and histidine/arginine, as observed for Ypq2 of S. cerevisiae, was also detected in the vesicles expressing stm1+. The expression levels of stm1+ in S. pombe cells significantly affected the vacuolar contents of lysine, histidine, and arginine. These results suggest that Stm1 is a vacuolar PQ-loop protein involved in the transport of basic amino acids across the vacuolar membrane.

    DOI: 10.1016/j.bbamem.2020.183507

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  • A PQ-loop protein Ypq2 is involved in the exchange of arginine and histidine across the vacuolar membrane of Saccharomyces cerevisiae. 査読 国際誌

    Miyuki Kawano-Kawada, Kunio Manabe, Haruka Ichimura, Takumi Kimura, Yuki Harada, Koichi Ikeda, Shiho Tanaka, Yoshimi Kakinuma, Takayuki Sekito

    Scientific reports   9 ( 1 )   15018 - 15018   2019年10月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:Springer Science and Business Media LLC  

    In nutrient-rich conditions, basic amino acids are actively accumulated into the vacuoles by H+-coupled transporters in Saccharomyces cerevisiae. In addition to the H+-coupled systems, the existence of an exchanger for arginine and histidine was indicated by kinetic analysis using isolated vacuolar membrane vesicles; however, the gene(s) involved in the activity has not been identified. Here, we show that the uptake activity of arginine driven by an artificially imposed histidine gradient decreased significantly by the disruption of the gene encoding vacuolar PQ-loop protein Ypq2, but not by those of Ypq1 and Ypq3. The exchange activity was restored by the expression of YPQ2. Furthermore, the substitution of a conserved proline residue, Pro29, in Ypq2 greatly decreased the exchange activity. These results suggest that Ypq2 is responsible for the exchange activity of arginine and histidine across the vacuolar membrane, and the conserved proline residue in the PQ-loop motif is required for the activity.

    DOI: 10.1038/s41598-019-51531-z

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    その他リンク: http://www.nature.com/articles/s41598-019-51531-z

  • Transport of Amino Acids across the Vacuolar Membrane of Yeast: Its Mechanism and Physiological Role.

    Miyuki Kawano-Kawada, Yoshimi Kakinuma, Takayuki Sekito

    Biological & pharmaceutical bulletin   41 ( 10 )   1496 - 1501   2018年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    In yeast cells growing under nutrient-rich condition approximately 50% of total amino acids are accumulated in the vacuoles; however, the composition of amino acids in the cytosol and in the vacuoles is quite different. The vacuoles, like lysosomes, degrade proteins transported into their lumen and produce amino acids. These amino acids should be quickly excreted to the cytosol under nutrient starvation condition and recycled for de novo protein synthesis. These suggest that specific machineries that transport amino acids into and out of the vacuoles operate at the vacuolar membrane. Several families of transporter involved in the vacuolar compartmentalization of amino acids have been identified and characterized using budding yeast Saccharomyces cerevisiae. In this review, we describe the vacuolar amino acid transporters identified so far and introduce recent findings on their activity and physiological function.

    DOI: 10.1248/bpb.b18-00165

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  • Functional identification of AtAVT3, a family of vacuolar amino acid transporters, in Arabidopsis 査読

    Yuki Fujiki, Hiromitsu Teshima, Shinji Kashiwao, Miyuki Kawano-Kawada, Yoshinori Ohsumi, Yoshimi Kakinuma, Takayuki Sekito

    FEBS LETTERS   591 ( 1 )   5 - 15   2017年1月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL  

    Amino acids stored in the vacuoles are exported to the cytosol mainly for protein synthesis; however, the molecular identity of vacuolar amino acid exporters remains obscure in plants. Here, we demonstrate that the heterologous expression of AtAVT3 genes, Arabidopsis homologs of AVT3 and AVT4 encoding vacuolar amino acid exporters in yeast, reduces vacuolar amino acid levels in the avt3 Delta avt4 Delta yeast cells. In vitro experiments revealed that C-14-labeled Ala and Pro are exported from vacuolar membrane vesicles by AtAvt3A in an ATP-dependent manner. In Arabidopsis, AtAvt3A fused with green fluorescent protein localizes to the vacuolar membrane. We propose that AtAVT3 family represents the long sought-for vacuolar amino acid exporters in plants.

    DOI: 10.1002/1873-3468.12507

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  • 液胞/リソソーム膜を介したアミノ酸輸送の分子機構 招待

    関藤孝之, 柿沼喜己

    化学と生物   54 ( 5 )   324‐334   2016年4月

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  • Vba4p, a vacuolar membrane protein, is involved in the drug resistance and vacuolar morphology of Saccharomyces cerevisiae 査読

    Miyuki Kawano-Kawada, Pongsanat Pongcharoen, Rieko Kawahara, Mayu Yasuda, Takashi Yamasaki, Koichi Akiyama, Takayuki Sekito, Yoshimi Kakinuma

    BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY   80 ( 2 )   279 - 287   2016年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS LTD  

    In the vacuolar basic amino acid (VBA) transporter family of Saccharomyces cerevisiae, VBA4 encodes a vacuolar membrane protein with 14 putative transmembrane helices. Transport experiments with isolated vacuolar membrane vesicles and estimation of the amino acid contents in vacuoles showed that Vba4p is not likely involved in the transport of amino acids. We found that the vba4 cells, as well as vba1 and vba2 cells, showed increased susceptibility to several drugs, particularly to azoles. Although disruption of the VBA4 gene did not affect the salt tolerance of the cells, vacuolar fragmentation observed under high salt conditions was less prominent in vba4 cells than in wild type, vba1, and vba2 cells. Vba4p differs from Vba1p and Vba2p as a vacuolar transporter but is important for the drug resistance and vacuolar morphology of S. cerevisiae.

    DOI: 10.1080/09168451.2015.1083401

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  • The amino-terminal hydrophilic region of the vacuolar transporter Avt3p is dispensable for the vacuolar amino acid compartmentalization of Schizosaccharomyces pombe 査読

    Miyuki Kawano-Kawada, Soracom Chardwiriyapreecha, Kunio Manabe, Takayuki Sekito, Koichi Akiyama, Kaoru Takegawa, Yoshimi Kakinuma

    BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY   80 ( 12 )   2291 - 2297   2016年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS LTD  

    Avt3p, a vacuolar amino acid exporter (656 amino acid residues) that is important for vacuolar amino acid compartmentalization as well as spore formation in Schizosaccharomyces pombe, has an extremely long hydrophilic region (approximately 290 amino acid residues) at its N-terminus. Because known functional domains have not been found in this region, its functional role was examined with a deletion mutant avt3((1-270)) expressed in S. pombe avt3 cells. The deletion of this region did not affect its intracellular localization or vacuolar contents of basic amino acids as well as neutral ones. The defect of avt3 cells in spore formation was rescued by the expression of avt3(+) but was not completely rescued by the expression of avt3((1-270)). The N-terminal region is thus dispensable for the function of Avt3p as an amino acid exporter, but it is likely to be involved in the role of Avt3p under nutritional starvation conditions.

    DOI: 10.1080/09168451.2016.1220819

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  • Ypq3p-dependent histidine uptake by the vacuolar membrane vesicles of Saccharomyces cerevisiae 査読

    Kunio Manabe, Miyuki Kawano-Kawada, Koichi Ikeda, Takayuki Sekito, Yoshimi Kakinuma

    BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY   80 ( 6 )   1125 - 1130   2016年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS LTD  

    The vacuolar membrane proteins Ypq1p, Ypq2p, and Ypq3p of Saccharomyces cerevisiae are known as the members of the PQ-loop protein family. We found that the ATP-dependent uptake activities of arginine and histidine by the vacuolar membrane vesicles were decreased by ypq2 Delta and ypq3 Delta mutations, respectively. YPQ1 and AVT1, which are involved in the vacuolar uptake of lysine/arginine and histidine, respectively, were deleted in addition to ypq2 Delta and ypq3 Delta. The vacuolar membrane vesicles isolated from the resulting quadruple deletion mutant ypq1 Delta ypq2 Delta ypq3 Delta avt1. completely lost the uptake activity of basic amino acids, and that of histidine, but not lysine and arginine, was evidently enhanced by overexpressing YPQ3 in the mutant. These results suggest that Ypq3p is specifically involved in the vacuolar uptake of histidine in S. cerevisiae. The cellular level of Ypq3p-HA(3) was enhanced by depletion of histidine from culture medium, suggesting that it is regulated by the substrate.

    DOI: 10.1080/09168451.2016.1141041

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  • Characterization of vacuolar amino acid transporter from Fusarium oxysporum in Saccharomyces cerevisiae 査読

    Siriporn Lunprom, Pongsanat Pongcharoen, Takayuki Sekito, Miyuki Kawano-Kawada, Yoshimi Kakinuma, Koichi Akiyama

    BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY   79 ( 12 )   1972 - 1979   2015年12月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS LTD  

    Fusarium oxysporum causes wilt disease in many plant families, and many genes are involved in its development or growth in host plants. A recent study revealed that vacuolar amino acid transporters play an important role in spore formation in Schizosaccharomyces pombe and Saccharomyces cerevisiae. To investigate the role of vacuolar amino acid transporters of this phytopathogenic fungus, the FOXG_11334 (FoAVT3) gene from F. oxysporum was isolated and its function was characterized. Transcription of FoAVT3 was upregulated after rapamycin treatment. A green fluorescent protein fusion of FoAvt3p was localized to vacuolar membranes in both S. cerevisiae and F. oxysporum. Analysis of the amino acid content of the vacuolar fraction and amino acid transport activities using vacuolar membrane vesicles from S. cerevisiae cells heterologously expressing FoAVT3 revealed that FoAvt3p functions as a vacuolar amino acid transporter, exporting neutral amino acids. We conclude that the FoAVT3 gene encodes a vacuolar neutral amino acid transporter.

    DOI: 10.1080/09168451.2015.1058703

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  • Functional Expression and Characterization of Schizosaccharomyces pombe Avt3p as a Vacuolar Amino Acid Exporter in Saccharomyces cerevisiae 査読

    Soracom Chardwiriyapreecha, Kunio Manabe, Tomoko Iwaki, Miyuki Kawano-Kawada, Takayuki Sekito, Siriporn Lunprom, Koichi Akiyama, Kaoru Takegawa, Yoshimi Kakinuma

    PLOS ONE   10 ( 6 )   2015年6月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:PUBLIC LIBRARY SCIENCE  

    In Saccharomyces cerevisiae, Avt3p and Avt4p mediate the extrusion of several amino acids from the vacuolar lumen into the cytosol. SpAvt3p of Schizosaccharomyces pombe, a homologue of these vacuolar amino acid transporters, has been indicated to be involved in spore formation. In this study, we confirmed that GFP-SpAvt3p localized to the vacuolar membrane in S. pombe. The amounts of various amino acids increased significantly in the vacuolar pool of avt3 Delta cells, but decreased in that of avt3(+)-overexpressing avt3. cells. These results suggest that SpAvt3p participates in the vacuolar compartmentalization of amino acids in S. pombe. To examine the export activity of SpAvt3p, we expressed the avt3(+) gene in S. cerevisiae cells. We found that the heterologously overproduced GFP-SpAvt3p localized to the vacuolar membrane in S. cerevisiae. Using the vacuolar membrane vesicles isolated from avt3+-overexpressing S. cerevisiae cells, we detected the export activities of alanine and tyrosine in an ATP-dependent manner. These activities were inhibited by the addition of a V-ATPase inhibitor, concanamycin A, thereby suggesting that the activity of SpAvt3p is dependent on a proton electrochemical gradient generated by the action of V-ATPase. In addition, the amounts of various amino acids in the vacuolar pools of S. cerevisiae cells were decreased by the overproduction of SpAvt3p, which indicated that SpAvt3p was functional in S. cerevisiae cells. Thus, SpAvt3p is a vacuolar transporter that is involved in the export of amino acids from S. pombe vacuoles.

    DOI: 10.1371/journal.pone.0130542

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  • Characterization of Avt1p as a vacuolar proton/amino acid antiporter in Saccharomyces cerevisiae 査読

    Junichi Tone, Ayumi Yoshimura, Kunio Manabe, Nami Murao, Takayuki Sekito, Miyuki Kawano-Kawada, Yoshimi Kakinuma

    BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY   79 ( 5 )   782 - 789   2015年5月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS LTD  

    Several genes for vacuolar amino acid transport were reported in Saccharomyces cerevisiae, but have not well been investigated. We characterized AVT1, a member of the AVT vacuolar transporter family, which is reported to be involved in lifespan of yeast. ATP-dependent uptake of isoleucine and histidine by the vacuolar vesicles of an AVT exporter mutant was lost by introducing avt1 increment mutation. Uptake activity was inhibited by the V-ATPase inhibitor: concanamycin A and a protonophore. Isoleucine uptake was inhibited by various neutral amino acids and histidine, but not by gamma-aminobutyric acid, glutamate, and aspartate. V-ATPase-dependent acidification of the vesicles was declined by the addition of isoleucine or histidine, depending upon Avt1p. Taken together with the data of the amino acid contents of vacuolar fractions in cells, the results suggested that Avt1p is a proton/amino acid antiporter important for vacuolar compartmentalization of various amino acids.

    DOI: 10.1080/09168451.2014.998621

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  • A vacuolar membrane protein Avt7p is involved in transport of amino acid and spore formation in Saccharomyces cerevisiae 査読

    Junichi Tone, Atsushi Yamanaka, Kunio Manabe, Nami Murao, Miyuki Kawano-Kawada, Takayuki Sekito, Yoshimi Kakinuma

    BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY   79 ( 2 )   190 - 195   2015年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS LTD  

    Active transport systems for various amino acids operate in the vacuolar membrane of Saccharomyces cerevisiae. The gene families for vacuolar amino acid transporters were identified by reverse genetics experiments. In the AVT transporter family, Avt1p works for active uptake of amino acid into vacuole, and Avt3p, Avt4p, and Avt6p for active extrusion of amino acid from vacuole to cytosol. Here, we found green fluorescent protein-tagged Avt7p, an unidentified member of the AVT family, localized to the vacuolar membrane of S. cerevisiae. Disruption of the AVT7 gene enhanced both vacuolar contents of several amino acids and uptake activities of glutamine and proline by vacuolar membrane vesicles. Efficiency of spore formation was impaired by the disruption of the AVT7 gene, suggesting the physiological importance of Avt7p-dependent efflux of amino acid from vacuoles under nutrient-poor condition.

    DOI: 10.1080/09168451.2014.963501

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  • Loss of ATP-dependent lysine uptake in the vacuolar membrane vesicles of Saccharomyces cerevisiae ypq1Δ mutant 査読

    Takayuki Sekito, Kyosuke Nakamura, Kunio Manabe, Junichi Tone, Yumika Sato, Nami Murao, Miyuki Kawano-Kawada, Miyuki Kawano-Kawada, Yoshimi Kakinuma Kakinuma, Yoshimi Kakinuma Kakinuma

    Bioscience, Biotechnology and Biochemistry   78 ( 7 )   1199 - 1202   2014年7月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    © 2014 Japan Society for Bioscience, Biotechnology, and Agrochemistry. Saccharomyces cerevisiae Ypq1p is a vacuolar membrane protein of the PQ-loop protein family. We found that ATP-dependent uptake activities of amino acids by vacuolar membrane vesicles were impaired by ypq1Δ mutation. Loss of lysine uptake was most remarkable, and the uptake was recovered by overproduction of Ypq1p. Ypq1p is thus involved in transport of amino acids into vacuoles.

    DOI: 10.1080/09168451.2014.918489

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  • Vacuolar transporter Avt4 is involved in excretion of basic amino acids from the vacuoles of Saccharomyces cerevisiae 査読

    Takayuki Sekito, Soracom Chardwiriyapreecha, Naoko Sugimoto, Masaya Ishimoto, Miyuki Kawano-Kawada, Yoshimi Kakinuma

    BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY   78 ( 6 )   969 - 975   2014年6月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS LTD  

    Basic amino acids (lysine, histidine and arginine) accumulated in Saccharomyces cerevisiae vacuoles should be mobilized to cytosolic nitrogen metabolism under starvation. We found that the decrease of vacuolar basic amino acids in response to nitrogen starvation was impaired by the deletion of AVT4 gene encoding a vacuolar transporter. In addition, overexpression of AVT4 reduced the accumulation of basic amino acids in vacuoles under nutrient-rich condition. In contrast to AVT4, the deletion and overexpression of AVT3, which encodes the closest homologue of Avt4p, did not affect the contents of vacuolar basic amino acids. Consistent with these, arginine uptake into vacuolar membrane vesicles was decreased by Avt4p-, but not by Avt3p-overproduction, whereas various neutral amino acids were excreted from vacuolar membrane vesicles in a manner dependent on either Avt4p or Avt3p. These results suggest that Avt4p is a vacuolar amino acid exporter involving in the recycling of basic amino acids.

    DOI: 10.1080/09168451.2014.910095

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  • Tributyltin induces cell cycle arrest at G1 phase in the yeast Saccharomyces cerevisiae. 査読

    Takayuki Sekito, Naoko Sugimoto, Masaya Ishimoto, Miyuki Kawano-Kawada, Koichi Akiyama, Sogo Nishimoto, Takuya Sugahara, Yoshimi Kakinuma

    The Journal of toxicological sciences   39 ( 2 )   311 - 7   2014年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Tributyltin (TBT) has long been recognized as a major environmental pollutant that can cause significant damage to the cellular functions as well as disruption of endocrine homeostasis. TBT induces apoptosis accompanied by production of reactive oxygen species (ROS) in mammalian and yeast cells. We observed that the budding yeast cells exposed to this compound at low concentrations exhibited cell growth arrest, but not cell death. Flow cytometric analysis of yeast cells without synchronization and morphological assessment of cells synchronized at M phase by nocodazole treatment indicated that TBT-exposed Saccharomyces cerevisiae cells were arrested at G1 phase of the cell cycle. This arrest was recovered by the addition of N-acetylcysteine, suggesting the involvement of ROS production by TBT. This is the first study to evaluate the action of TBT on cell cycle events.

    DOI: 10.2131/jts.39.311

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  • Tributyltin induces cell cycle arrest at G1 phase in the yeast Saccharomyces cerevisiae. 査読

    Takayuki Sekito, Naoko Sugimoto, Masaya Ishimoto, Miyuki Kawano-Kawada, Koichi Akiyama, Sogo Nishimoto, Takuya Sugahara, Yoshimi Kakinuma

    The Journal of toxicological sciences   39 ( 2 )   311 - 7   2014年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Tributyltin (TBT) has long been recognized as a major environmental pollutant that can cause significant damage to the cellular functions as well as disruption of endocrine homeostasis. TBT induces apoptosis accompanied by production of reactive oxygen species (ROS) in mammalian and yeast cells. We observed that the budding yeast cells exposed to this compound at low concentrations exhibited cell growth arrest, but not cell death. Flow cytometric analysis of yeast cells without synchronization and morphological assessment of cells synchronized at M phase by nocodazole treatment indicated that TBT-exposed Saccharomyces cerevisiae cells were arrested at G1 phase of the cell cycle. This arrest was recovered by the addition of N-acetylcysteine, suggesting the involvement of ROS production by TBT. This is the first study to evaluate the action of TBT on cell cycle events.

    DOI: 10.2131/jts.39.311

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  • Functional expression of Schizosaccharomyces pombe Vba2p in the vacuolar membrane of Saccharomyces cerevisiae. 査読 国際誌

    Pongsanat Pongcharoen, Miyuki Kawano-Kawada, Tomoko Iwaki, Naoko Sugimoto, Takayuki Sekito, Koichi Akiyama, Kaoru Takegawa, Yoshimi Kakinuma

    Bioscience, biotechnology, and biochemistry   77 ( 9 )   1988 - 90   2013年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    A vacuolar membrane protein, Vba2p of Schizosaccharomyces pombe, is involved in basic amino acid uptake by intact cells. Here we found evidence that Vba2p mediated ATP-dependent lysine uptake by vacuolar membrane vesicles of Saccharomyces cerevisiae. Vba2p was also responsible for quinidine sensitivity, and the addition of lysine improved cell growth on quinidine-containing media. These findings should be useful for further characterization of Vba2p.

    DOI: 10.1271/bbb.130387

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  • Vba5p, a Novel Plasma Membrane Protein Involved in Amino Acid Uptake and Drug Sensitivity in Saccharomyces cerevisiae 査読

    Masamitsu Shimazu, Teruhiro Itaya, Pongsanat Pongcharoen, Takayuki Sekito, Miyuki Kawano-Kawada, Yoshimi Kakinuma

    BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY   76 ( 10 )   1993 - 1995   2012年10月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS LTD  

    Vba5p is closest to Vba3p in the vacuolar transporter for basic amino acids (VBA) family of Saccharomyces cerevisiae. We found that green fluorescence protein (GFP)-tagged Vba5p localized exclusively to the plasma membrane. The uptake of lysine and arginine by whole cells was little affected by deletion of the VBA5 gene, but was stimulated by overexpression of the VBA5 gene. The inhibitory effect of 4-nitroquinoline N-oxide on cell growth was accelerated by expression of the VBA5 gene, and was lessened by the addition of arginine. These results suggest that Vba5p is a plasma membrane protein involved in amino acid uptake and drug sensitivity.

    DOI: 10.1271/bbb.120455

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  • ATP-Dependent Export of Neutral Amino Acids by Vacuolar Membrane Vesicles of Saccharomyces cerevisiae 査読

    Masaya Ishimoto, Naoko Sugimoto, Takayuki Sekito, Miyuki Kawano-Kawada, Yoshimi Kakinuma

    BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY   76 ( 9 )   1802 - 1804   2012年9月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS LTD  

    Amino acid analysis of Saccharomyces cerevisiae cells indicated that neutral amino acids such as glycine and alanine were probably excluded from the vacuoles, and that vacuolar H+-ATPase (V-ATPase) was involved in the vacuolar compartmentalization of these amino acids. We found that vacuolar membrane vesicles export neutral amino acids in an ATP-dependent manner. This is important in identifying vacuolar transporters for neutral amino acids.

    DOI: 10.1271/bbb.120372

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  • Atg9 vesicles are an important membrane source during early steps of autophagosome formation 査読

    Hayashi Yamamoto, Soichiro Kakuta, Tomonobu M. Watanabe, Akira Kitamura, Takayuki Sekito, Chika Kondo-Kakuta, Rie Ichikawa, Masataka Kinjo, Yoshinori Ohsumi

    JOURNAL OF CELL BIOLOGY   198 ( 2 )   219 - 233   2012年7月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ROCKEFELLER UNIV PRESS  

    During the process of autophagy, cytoplasmic materials are sequestered by double-membrane structures, the autophagosomes, and then transported to a lytic compartment to be degraded. One of the most fundamental questions about autophagy involves the origin of the autophagosomal membranes. In this study, we focus on the intracellular dynamics of Atg9, a multispanning membrane protein essential for autophagosome formation in yeast. We found that the vast majority of Atg9 existed on cytoplasmic mobile vesicles (designated Atg9 vesicles) that were derived from the Golgi apparatus in a process involving Atg23 and Atg27. We also found that only a few Atg9 vesicles were required for a single round of autophagosome formation. During starvation, several Atg9 vesicles assembled individually into the preautophagosomal structure, and eventually, they are incorporated into the autophagosomal outer membrane. Our findings provide conclusive linkage between the cytoplasmic Atg9 vesicles and autophagosomal membranes and offer new insight into the requirement for Atg9 vesicles at the early step of autophagosome formation.

    DOI: 10.1083/jcb.201202061

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  • Bfr1p is responsible for tributyltin resistance in Schizosaccharomyces pombe 査読

    Koichi Akiyama, Tomoko Iwaki, Naoko Sugimoto, Soracom Chardwiriyapreecha, Miyuki Kawano, Sogo Nishimoto, Takuya Sugahara, Takayuki Sekito, Yoshimi Kakinuma

    JOURNAL OF TOXICOLOGICAL SCIENCES   36 ( 1 )   117 - 120   2011年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:JAPANESE SOC TOXICOLOGICAL SCIENCES  

    ATP-binding cassette (ABC) transporter plays an important role for resistance against xenobiotics. There are eleven ABC transporter genes in the genome of fission yeast Schizosaccharomyces pombe. We examined the role of ABC transporter against the toxicity of tributyltin chloride (TBT), a widespread environmental pollutant, in cell growth. Among individual ABC transporter mutants, the growth of a mutant deficient in Bfr1p, a plasma membrane-embedded transporter, was extremely sensitive to TBT. The lethal TBT concentration inducing 50% of cell death (LC50) was 25 mu M for the parent strain and 10.2 mu m for the bfr1 Delta mutant. Thus, Bfr1p was responsible for TBT resistance in S. pombe.

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  • Atg22p, a Vacuolar Membrane Protein Involved in the Amino Acid Compartmentalization of Schizosaccharomyces pombe 査読

    Naoko Sugimoto, Tomoko Iwaki, Soracom Chardwiriyapreecha, Masamitsu Shimazu, Miyuki Kawano, Takayuki Sekito, Kaoru Takegawa, Yoshimi Kakinuma

    BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY   75 ( 2 )   385 - 387   2011年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS LTD  

    The fission yeast Schizosaccharomyces pombe has a homolog of the budding yeast Atg22p, which is involved in spore formation (Mukaiyama H. et al., Microbiology, 155, 3816-3826 (2009)). GFP-tagged Atg22p in the fission yeast was localized to the vacuolar membrane. Upon disruption of atg22, the amino acid levels of the cellular fraction as well as the vacuolar fraction decreased. The uptake of several amino acids, such as lysine, histidine, and arginine, was impaired in atg22 Delta cells. S. pombe Atg22p plays an important role in the compartmentalization of amino acids.

    DOI: 10.1271/bbb.100747

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  • Bfr1p is responsible for tributyltin resistance in Schizosaccharomyces pombe 査読

    Koichi Akiyama, Tomoko Iwaki, Naoko Sugimoto, Soracom Chardwiriyapreecha, Miyuki Kawano, Sogo Nishimoto, Takuya Sugahara, Takayuki Sekito, Yoshimi Kakinuma

    Journal of Toxicological Sciences   36 ( 1 )   117 - 120   2011年1月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    ATP-binding cassette (ABC) transporter plays an important role for resistance against xenobiotics. There are eleven ABC transporter genes in the genome of fission yeast Schizosaccharomyces pombe. We examined the role of ABC transporter against the toxicity of tributyltin chloride (TBT), a widespread environmental pollutant, in cell growth. Among individual ABC transporter mutants, the growth of a mutant deficient in Bfrlp, a plasma membrane-embedded transporter, was extremely sensitive to TBT. The lethal TBT concentration inducing 50% of cell death (LC50) was 25 μM for the parent strain and 10.2 μM for the bfrlΔ mutant. Thus, Bfr1p was responsible for TBT resistance in S. pombe.

    DOI: 10.2131/jts.36.117

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  • Vba2p, A Vacuolar Membrane Protein Involved in Basic Amino Acid Transport in Schizosaccharomyces pombe 査読

    Naoko Sugimoto, Tomoko Iwaki, Soracom Chardwiriyapreecha, Masamitsu Shimazu, Takayuki Sekito, Kaoru Takegawa, Yoshimi Kakinuma

    BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY   74 ( 10 )   2166 - 2169   2010年10月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS LTD  

    A recent study filling the gap in the genome sequence in the left arm of chromosome 2 of Schizosaccharomyces pombe revealed a homolog of budding yeast Vba2p, a vacuolar transporter of basic amino acids. GFP-tagged Vba2p in fission yeast was localized to the vacuolar membrane. Upon disruption of vba2, the uptake of several amino acids, including lysine, histidine, and arginine, was impaired. A transient increase in lysine uptake under nitrogen starvation was lowered by this mutation. These findings suggest that Vba2p is involved in basic amino acid transport in S. pombe under diverse conditions.

    DOI: 10.1271/bbb.100627

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  • Vacuolar Amino Acid Transporter Avt5p Is Responsible for Lithium Uptake in Schizosaccharomyces pombe 査読

    Tomoko Iwaki, Takayuki Sekito, Yoshimi Kakinuma

    BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY   74 ( 8 )   1719 - 1721   2010年8月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS LTD  

    The fission yeast Schizosaccharomyces pombe was sensitive to salinity; cell growth was stopped by 0.5 M NaCl and by 10 mm LiCl. The avt5(+) gene encodes a vacuolar transporter with a broad specificity for amino acids. We found that the avt5 Delta mutant became highly tolerant of Li+ and Na+ in growth. Concanamycin A-sensitive Li+ uptake as well as cellular Li+ content was lower in the avt5 mutant, suggesting a role of Avt5p in cellular uptake of toxic Li+.

    DOI: 10.1271/bbb.100259

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  • Avt5p is required for vacuolar uptake of amino acids in the fission yeast Schizosaccharomyces pombe 査読

    Soracom Chardwiriyapreecha, Hiroyuki Mukaiyama, Takayuki Sekito, Tomoko Iwaki, Kaoru Takegawa, Yoshimi Kakinuma

    FEBS LETTERS   584 ( 11 )   2339 - 2345   2010年6月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY  

    We identified SPBC1685.07c of Schizosaccharomyces pombe as a novel vacuolar protein, Avt5p, with similarity to vacuolar amino acid transporters Avt5p from Saccharomyces cerevisiae. Avt5p localizes to the vacuolar membrane and upon disruption of avt5, uptake of histidine, glutamate, tyrosine, arginine, lysine or serine was impaired. During nitrogen starvation, the transient increase of vacuolar lysine transport observed for wild-type cells still occurred in the mutant cells, however, uptake of glutamate did not significantly increase in response to nitrogen starvation. Our results show that under diverse growth conditions Avt5p is involved in vacuolar transport of a selective set of amino acids. (C) 2010 Federation of European Biochemical Societies. Published by Elsevier B. V. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.febslet.2010.04.012

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  • Avt5p is required for vacuolar uptake of amino acids in the fission yeast Schizosaccharomyces pombe 査読

    Soracom Chardwiriyapreecha, Hiroyuki Mukaiyama, Takayuki Sekito, Tomoko Iwaki, Kaoru Takegawa, Yoshimi Kakinuma

    FEBS Letters   584 ( 11 )   2339 - 2345   2010年6月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    We identified SPBC1685.07c of Schizosaccharomyces pombe as a novel vacuolar protein, Avt5p, with similarity to vacuolar amino acid transporters Avt5p from Saccharomyces cerevisiae. Avt5p localizes to the vacuolar membrane and upon disruption of avt5, uptake of histidine, glutamate, tyrosine, arginine, lysine or serine was impaired. During nitrogen starvation, the transient increase of vacuolar lysine transport observed for wild-type cells still occurred in the mutant cells, however, uptake of glutamate did not significantly increase in response to nitrogen starvation. Our results show that under diverse growth conditions Avt5p is involved in vacuolar transport of a selective set of amino acids. © 2010 Federation of European Biochemical Societies.

    DOI: 10.1016/j.febslet.2010.04.012

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  • Evidence for Avt6 as a vacuolar exporter of acidic amino acids in Saccharomyces cerevisiae cells 査読

    Thippayarat Chahomchuen, Kana Hondo, Mariko Ohsaki, Takayuki Sekito, Yoshimi Kakinuma

    JOURNAL OF GENERAL AND APPLIED MICROBIOLOGY   55 ( 6 )   409 - 417   2009年12月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:MICROBIOL RES FOUNDATION  

    Here we examined the significance of Avt6, a vacuolar exporter of glutamate and aspartate suggested by the in vitro membrane vesicle experiment, in vacuolar compartmentalization of amino acids in Saccharomyces cerevisiae cells. Fluorescent microscopic observation of GFP-fused Avt6 revealed it to be exclusively localized to the vacuolar membrane, with the amount of Myc-tagged Avt6 significantly increased under nitrogen starvation. Glutamate uptake by cells was enhanced by deletion of the AVT6 gene, indicating indirect involvement of Avt6 in cellular glutamate accumulation. Differences in acidic amino acid content of both total and vacuolar fractions were insignificant between the parent and avt6 Delta cells when cultured in nutrient-rich conditions. However, in nitrogen-starved conditions, the amount of glutamate and aspartate in the vacuolar fraction was notably increased in the avt6 Delta cells. Avt6 is thus involved in vacuolar amino acid compartmentalization in S. cerevisiae cells, especially under conditions of nitrogen starvation.

    DOI: 10.2323/jgam.55.409

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  • Tributyltin sensitivity of vacuolar-type Na+-transporting ATPase from Enterococcus hirae 査読

    Soracom Chardwiriyapreecha, Tomohiro Inoue, Naoko Sugimoto, Takayuki Sekito, Ichiro Yamato, Takeshi Murata, Michio Homma, Yoshimi Kakinuma

    JOURNAL OF TOXICOLOGICAL SCIENCES   34 ( 5 )   575 - 579   2009年10月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:JAPANESE SOC TOXICOLOGICAL SCIENCES  

    Tributyltin chloride (TBT), an environmental pollutant, is toxic to a variety of eukaryotic and prokaryotic organisms. Some members of F-ATP synthase (F-ATPase)/vacuolar type ATPase (V-ATPase) superfamily have been identified as the molecular target of this compound. TBT inhibited the activities of W-transporting or Na+-transporting F-ATPase as well as H+-transporting V-ATPase originated from various organisms. However, the sensitivity to TBT of Na+-transporting V-ATPase has not been investigated. We examined the effect of TBT on Na+-transporting V-ATPase from an eubacterium Enterococus hirae. The ATP hydrolytic activity of E. hirae V-ATPase in purified form as well as in membrane-bound form was little inhibited by less than 10 mu M TBT; IC50 for TBT inhibition of purified enzyme was estimated to be about 35 mu M. Active sodium transport by E. hirae-cells, indicating the in vivo activity of this V-ATPase, was not inhibited by 20 mu M TBT. By contrast, IC50 of H+-transporting V-ATPase of the vacuolar membrane vesicles from Saccharomyces cerevisiae was about 0.2 mu M. E. hirae V-ATPase is thus extremely less sensitive to TBT.

    DOI: 10.2131/jts.34.575

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  • Tributyltin induces Yca1p-dependent cell death of yeast Saccharomyces cerevisiae 査読

    Thippayarat Chahomchuen, Koichi Akiyama, Takayuki Sekito, Naoko Sugimoto, Masaaki Okabe, Sogo Nishimoto, Takuya Sugahara, Yoshimi Kakinuma

    JOURNAL OF TOXICOLOGICAL SCIENCES   34 ( 5 )   541 - 545   2009年10月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:JAPANESE SOC TOXICOLOGICAL SCIENCES  

    Tributyltin chloride (TBT), an environmental Pollutant, is toxic to a variety of eukaryotic and prokaryotic organisms. Although it has been reported that TBT induces apoptotic cell death in mammalian, the action of TBT on eukaryotic microorganisms has not yet been fully investigated. In this study we examined the mechanism involved in cell death caused by TBT exposure in Saccharomyces cerevisiae. The median lethal concentration of TBT was 10 mu M for the parent strain BY4741 and 3 mu M for the pdr5A mutant defective in a major multidrug transporter, respectively. Fluorescence microscopic observations revealed nuclear condensation and chromatin fragmentation in cells treated with TBT indicating that cells underwent an apoptosis-like cell dearth. TBT-induced cell death was suppressed by deletion of the ycal gene encoding a homologue of the mammalian caspase. In parallel, reactive oxygen species (ROS) were produced by TBT. These results suggest that TBT induces apoptosis-like cell death in yeast via an Yca1 p-dependent pathway possibly downstream of the ROS production. This is the first report on TBT-induced apoptotic cell death in yeast.

    DOI: 10.2131/jts.34.541

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  • A Simple and Specific Procedure to Permeabilize the Plasma Membrane of Schizosaccharomyces pombe 査読

    Soracom Chardwiriyapreecha, Kana Hondo, Hiroko Inada, Thippayarat Chahomchuen, Takayuki Sekito, Tomoko Iwaki, Yoshimi Kakinuma

    BIOSCIENCE BIOTECHNOLOGY AND BIOCHEMISTRY   73 ( 9 )   2090 - 2095   2009年9月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS LTD  

    Cu2+-treatment is a useful technique in selectively permeabilizing the fungal plasma membrane. We describe herein a practical application with Schizosaccharomyces pombe. Incubation of cells with 0.5 mM CuCl2 at 30 degrees C for 20 min induced efficient leakage of cytosolic constituents. The kinetic characteristics of the calcium and amino acid flux from Cu2+-treated S. pombe cells suggested that the Cu2+ treatment permeabilized the plasma membrane without loss of vacuolar function. As a further application of the method, the amino acid contents of Cu2+-treated and untreated cells were also determined. The amino acid pool of Cu2+-treated wild-type cells was enriched in basic amino acids but not in acidic amino acids, as is characteristic of the vacuolar amino acid pool of fungi, including Saccharomyces cerevisiae and Neurosporra crassa. The amino acid pool of the S. pombe V-ATPase mutant vma1 Delta was also successfully determined. We conclude that the vacuolar amino acid pool of S. pombe can be measured using Cu2+-treated cells. The method is simple, inexpensive, and rapid relative to the isolation of vacuolar vesicles, making it useful in estimating vacuolar pools and transport across the vacuolar membrane.

    DOI: 10.1271/bbb.90319

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  • Atg17 recruits Atg9 to organize the pre-autophagosomal structure 査読

    Takayuki Sekito, Tomoko Kawamata, Rie Ichikawa, Kuninori Suzuki, Yoshinori Ohsumi

    GENES TO CELLS   14 ( 5 )   525 - 538   2009年5月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL PUBLISHING, INC  

    Autophagy is a degradation system of cytoplasmic proteins and organelles via formation of double-membrane vesicles called autophagosomes. In the yeast Saccharomyces cerevisiae, autophagosomes are formed via the pre-autophagosomal structure (PAS) in a manner dependent on Atg proteins. Under nutrient-rich condition, Atg9 is recruited to the PAS by binding to Atg11 for the Cvt pathway. However, because Atg9 is recruited to the PAS in atg11 Delta cells in starved condition and autophagy is induced, autophagy-specific mechanism for the Atg9 recruitment to the PAS has been assumed. Here, we demonstrate that, in autophagy-inducing condition, Atg9 is recruited to the PAS in a manner dependent on Atg17. Atg9 physically interacts with Atg17 in the presence of rapamycin. This interaction requires Atg1, a protein kinase essential for autophagy. Consistently, the Atg17-dependent PAS localization of Atg9 requires Atg1. However, its kinase activity is dispensable for this process. It rather regulates the equilibrium of assembly and disassembly of Atg9 at the PAS.

    DOI: 10.1111/j.1365-2443.2009.01299.x

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  • The Atg18-Atg2 complex is recruited to autophagic membranes via phosphatidylinositol 3-phosphate and exerts an essential function 査読

    Keisuke Obara, Takayuki Sekito, Kaori Niimi, Yoshinori Ohsumi

    JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY   283 ( 35 )   23972 - 23980   2008年8月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER SOC BIOCHEMISTRY MOLECULAR BIOLOGY INC  

    Atg18 is essential for both autophagy and the regulation of vacuolar morphology. The latter process is mediated by phosphatidylinositol 3,5-bisphosphate binding, which is dispensable for autophagy. Atg18 also binds to phosphatidylinositol 3-phosphate ( PtdIns( 3) P) in vitro. Here, we investigate the relationship between PtdIns( 3) P-binding of Atg18 and autophagy. Using an Atg18 variant, Atg18(FTTG), which is unable to bind phosphoinositides, we found that PtdIns( 3) P binding of Atg18 is essential for full activity in both selective and nonselective autophagy. Atg18( FTTG) formed a complex with Atg2 in a normal manner, and Atg18-Atg2 complex formation occurred in cells in the absence of PtdIns( 3) P, indicating that Atg18-Atg2 complex formation is independent of PtdIns(3)P-binding of Atg18. Atg18 localized to endosomes, the vacuolar membrane, and autophagic membranes, whereas Atg18( FTTG) did not localize to these structures. The localization of Atg2 to autophagic membranes was also lost in Atg18( FTTG) cells. These data indicate that PtdIns( 3) P-binding of Atg18 is involved in directing the Atg18-Atg2 complex to autophagic membranes. Connection of a 2 x FYVE domain, a specific PtdIns(3)P-binding domain, to the C terminus of Atg18( FTTG) restored the localization of Atg18-Atg2 to autophagic membranes and full autophagic activity, indicating that PtdIns(3)P-binding by Atg18 is dispensable for the function of the Atg18-Atg2 complex but is required for its localization. This also suggests that PtdIns( 3) P does not act allosterically on Atg18. Taken together, Atg18 forms a complex with Atg2 irrespective of PtdIns( 3) P binding, associates tightly to autophagic membranes by interacting with PtdIns( 3) P, and plays an essential role.

    DOI: 10.1074/jbc.M803180200

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  • Novel families of vacuolar amino acid transporters

    Takayuki Sekito, Yuki Fujiki, Yoshinori Ohsumi, Yoshimi Kakinuma

    IUBMB LIFE   60 ( 8 )   519 - 525   2008年8月

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    記述言語:英語   出版者・発行元:JOHN WILEY & SONS INC  

    Amino acids are compartmentalized in the vacuoles of microorganisms and plants. In Saccharomyces cerevisiae, basic amino acids accumulate preferentially into vacuoles but acidic amino acids are almost excluded from them. This indicates that selective machineries operate at the vacuolar membrane. The members of the amino acid/auxin permease family and the major facilitator superfamily involved in the vacuolar compartmentalization of amino acids have been recently identified in studies using S. cerevisiae. Homologous genes for these transporters are also found in plant and mammalian genomes. The physiological significance in response to nitrogen starvation can now be discussed. (C) 2008 IUBMB.

    DOI: 10.1002/iub.92

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  • Identification of the fnxl(+) and fnx2(+) genes for vacuolar amino acid transporters in Schizosaccharomyces pombe 査読

    Soracom Chardwiriyapreecha, Masamitsu Shimazu, Tomotake Morita, Takayuki Sekito, Koichi Akiyama, Kaoru Takegawa, Yoshimi Kakinuma

    FEBS LETTERS   582 ( 15 )   2225 - 2230   2008年6月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    We have identified the Schizosaccharonvees pombe SPBC3E7.06c gene (fnx2(+)) from a homology search with the fiix1(+) gene involving in G(0) arrest upon nitrogen starvation. Green fluorescent protein-fused Fnx1p and Fnx2p localized exclusively to the vacuolar membrane. Uptake of histidine or isoleucine by S. pombe cells was inhibited by concanamycin A, a specific inhibitor of the vacuolar H+-ATPase. Amino acid uptake was also defective in the vacuolar ATPase mutant, suggesting that vacuolar compartmentalization is critical for amino acid uptake by whole cells. In both Delta fnx1 and Delta fnx2 mutant cells, uptake of lysine, isoleucine or asparagine was impaired. These results suggest that Jnx1(+) and fnx2(+) are involved in vacuolar amino acid uptake in S. pombe. (C) 2008 Federation of European Biochemical Societies. Published by Elsevier B.V. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.febslet.2008.05.017

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  • Organization of the pre-autophagosomal structure responsible for autophagosome formation 査読

    Tomoko Kawamata, Yoshiaki Kamada, Yukiko Kabeya, Takayuki Sekito, Yoshinori Ohsumi

    MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL   19 ( 5 )   2039 - 2050   2008年5月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER SOC CELL BIOLOGY  

    Autophagy induced by nutrient depletion is involved in survival during starvation conditions. In addition to starvation-induced autophagy, the yeast Saccharomyces cerevisiae also has a constitutive autophagy-like system, the Cvt pathway. Among 31 autophagy-related (Atg) proteins, the function of Atg17, Atg29, and Atg31 is required specifically for autophagy. In this study, we investigated the role of autophagy-specific (i.e., non-Cvt) proteins under autophagy-inducing conditions. For this purpose, we used atg11 Delta cells in which the Cvt pathway is abrogated. The autophagy-unique proteins are required for the localization of Atg proteins to the pre-autophagosomal structure (PAS), the putative site for autophagosome formation, under starvation condition. It is likely that these Atg proteins function as a ternary complex, because Atg29 and Atg31 bind to Atg17. The Atg1 kinase complex (Atg1-Atg13) is also essential for recruitment of Atg proteins to the PAS. The assembly of Atg proteins to the PAS is observed only under autophagy-inducing conditions, indicating that this structure is specifically involved in autophagosome formation. Our results suggest that Atg1 complex and the autophagy-unique Atg proteins cooperatively organize the PAS in response to starvation signals.

    DOI: 10.1091/mbc.E07-10-1048

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  • Characterization of amino acid recycling process in yeast autophagy.

    T. Chahomchuen, T. Sekito, K. Hondo, S. Nishimoto, T. Sugahara, Y. Kakinuma

    Interdisciplinary Studies on Environmental Chemistry: Biological Responses to Chemical Pollutants   1   251 - 261   2008年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(国際会議プロシーディングス)  

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  • Vacuolar-type H+-translocating ATPase is the target of tributylin Chloride.

    K. Akiyama, S. Chardwiriyapreecha, T. Chahomchuen, N. Sugimoto, T. Sekito, S. Nishimoto, T. Sugahara, Y. Kakinuma

    Interdisciplinary Studies on Environmental Chemistry: Biological Responses to Chemical Pollutants   1   241 - 249   2008年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(国際会議プロシーディングス)  

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  • Hierarchy of Atg proteins in pre-autophagosomal structure organization 査読

    Kuninori Suzuki, Yuka Kubota, Takayuki Sekito, Yoshinori Ohsumi

    GENES TO CELLS   12 ( 2 )   209 - 218   2007年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BLACKWELL PUBLISHING  

    Autophagy is a bulk degradation process that is conserved in eukaryotic cells and functions in the turnover of cytoplasmic materials and organelles. When eukaryotic cells face nutrient starvation, the autophagosome, a double-membraned organelle, is generated from the pre-autophagosomal structure (PAS). In the yeast Saccharomyces cerevisiae, 16 ATG (autography-related) genes are essential for autophagosome formation. Most of the Atg proteins are involved in the PAS, leading to autophagosome production. However, the mechanism of PAS organization remains to be elucidated. Here, we performed a systematic and quantitative analysis by fluorescence microscopy to develop a hierarchy map of Atg proteins involved in PAS organization. This analysis suggests that Atg17p is the most basic protein in PAS organization: when it is specifically targeted to the plasma membrane, other Atg proteins are recruited to that location, suggesting that Atg17p acts as a scaffold protein to organize Atg proteins to the PAS.

    DOI: 10.1111/j.1365-2443.2007.01050.x

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  • オートファジー‐リソソーム/液胞系 A.出芽酵母のオートファジーに必須な遺伝子群 オートファゴソームを紡ぎ出す5つのAtg蛋白質群

    中戸川仁, 花田孝雄, 鎌田芳彰, 小原圭介, 関藤孝之

    蛋白質 核酸 酵素   51 ( 10 )   1457 - 1463   2006年8月

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    記述言語:日本語  

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  • Assortment of phosphatidylinositol 3-kinase complexes-Atg14p directs association of complex I to the pre-autophagosomal structure in Saccharomyces cerevisiae 査読

    K Obara, T Sekito, Y Ohsumi

    MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL   17 ( 4 )   1527 - 1539   2006年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER SOC CELL BIOLOGY  

    In the yeast Saccharomyces cerevisiae, two similar phosphatidylinositol 3-kinase complexes (complexes I and II) function in distinct biological processes, complex I in autophagy and complex II in the vacuolar protein sorting via endosomes. Atg14p is only integrated into complex I, likely facilitating the function of complex I in autophagy. Deletion analysis of Atg14p revealed that N-terminal region containing the coiled-coil structures was essential and sufficient for autophagy. Atg14p localized to pre-autophagosomal structure (PAS) and vacuolar membranes, whereas Vps38p, a component specific to complex 11, localized to endosomes and vacuolar membranes. Vps34p and Vps30p, components shared by the two complexes, localized to the PAS, vacuolar membranes, and several punctate structures that included endosomes. The localization of these components to the PAS was Atg14p dependent but not dependent on Vps38p. Conversely, localization of these proteins to endosomes required Vps38p but not Atg14p. Vps15p, regulatory subunit of the Vps34p complexes, localized to the PAS, vacuolar membranes, and punctate structures independent of both Atg14p and Vps38p. Together, these results indicate that complexes I and II function in distinct biological processes by localizing to specific compartments in a manner mediated by specific components of each complex, Atg14p and Vps38p, respectively.

    DOI: 10.1091/mbc.E05-09-0841

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  • A family of basic amino acid transporters of the vacuolar membrane from Saccharomyces cerevisiae 査読

    M Shimazu, T Sekito, K Akiyama, Y Ohsumi, Y Kakinuma

    JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY   280 ( 6 )   4851 - 4857   2005年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER SOC BIOCHEMISTRY MOLECULAR BIOLOGY INC  

    Among the members of the major facilitator superfamily of Saccharomyces cerevisiae, we identified genes involved in the transport into vacuoles of the basic amino acids histidine, lysine, and arginine. ATP-dependent uptake of histidine and lysine by isolated vacuolar membrane vesicles was impaired in YMR088c, a vacuolar basic amino acid transporter 1 (VBA1)-deleted strain, whereas uptake of tyrosine or calcium was little affacted. This defect in histidine and lysine uptake was complemented fully by introducing the VBA1 gene and partially by a gene encoding Vba1p fused with green fluorescent protein, which was determined to localize exclusively to the vacuolar membrane. A defect in the uptake of histidine, lysine, or arginine was also observed in the vacuolar membrane vesicles of mutants YBR293w (VBA2) and YCLO69w (VBA3). These three VBA genes are closely related phylogenetically and constitute a new family of basic amino acid transporters in the yeast vacuole.

    DOI: 10.1074/jbc.M412617200

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  • Up-to-dating of complete sequenced DNA data of Hansenula wingei yeast mitochondria.

    Takayuki Sekito, Kozi Okamoto, Hiromichi Kitano, Kazuo Yoshida

    Nucleic acids symposium series (2004)   179 - 180   2004年12月

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    To update sequenced data, we determined the 5&#039; and 3&#039; termini of yeast Hansenula wingei (Pichia canadensis) mitochondrial (mt) large subunit ribosomal RNA (LSU) which is encoded in the mt genome. The 5&#039; end position was mapped downstream from a putative transcription starting site which is homologous to a Saccharomyces cerevisiae mitochondrial promoter sequence. This suggests that the primary transcript of LSU is processed from 5&#039; end and then mature transcript is formed. This processing is different from that of S. cerevisiae mt LSU in which processing on its 5&#039; end does not occur. Based on the sequence data of H. wingei mt LSU, we constructed its secondary structure, and compared it with those of the other fungal organisms. Conserved regions of H. wingei LSU were identified and used for subsequent phylogenetic analysis. In genome structure and gene content, H. wingei mt genome has several characteristics similar to those in filamentous fungi, but the phylogenetic analysis indicates closer kinship to yeast S. cerevisiae. This agrees with previous non-sequencing phylogenies and suggests that extraordinary rearrangements have occurred in yeast mt genomes during divergent evolution.

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  • Retrograde signaling is regulated by the dynamic interaction between Rtg2p and Mks1p 査読

    ZC Liu, T Sekito, M Spirek, J Thornton, RA Butow

    MOLECULAR CELL   12 ( 2 )   401 - 411   2003年8月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:CELL PRESS  

    Activation of retrograde signaling (RS) by mitochondrial dysfunction or by inhibition of TOR kinases in yeast results in nuclear accumulation of the transcription factors, Rtg1p and Rtg3p. This process requires Rtg2p, a novel cytoplasmic protein with an N-terminal ATP binding domain. We show that Rtg2p controls RS by reversibly binding a negative regulator, Mksip. The inhibitory form of Mksip is phosphorylated and complexed with the 14-3-3 proteins, Bmh1p and Bmh2p, which are also negative regulators of RS. A hypophosphorylated form of Mks1p bound to Rtg2p is inactive. Point mutations in the Rtg2p ATP binding domain simultaneously block RS and Mks1p-Rtg2p interaction. We propose that activation of RS via mitochondrial dysfunction and TOR inhibition intersect at the Rtg2pMks1p switch.

    DOI: 10.1016/S1097-2765(03)00285-5

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  • Autophagy in yeast: A TOR-mediated response to nutrient starvation

    Y Kamada, T Sekito, Y Ohsumi

    TOR-TARGET OF RAPAMYCIN   279   73 - 84   2003年

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    記述言語:英語   出版者・発行元:SPRINGER-VERLAG BERLIN  

    TOR plays a key role in cell growth and cell-cycle progression, but in addition recent studies have shown that TOR is also involved in the regulation of a number of molecular processes associated with nutrient deprivation, such as autophagy. In budding yeast, TOR negatively regulates activation of Apg1 protein kinase, which is essential for the induction of autophagy. This review describes recent research in this field and the mechanism by which TOR mediates induction of autophagy.

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  • RTG-dependent mitochondria-to-nucleus signaling is regulated by MKS1 and is linked to formation of yeast prion [URE3] 査読

    T Sekito, ZC Liu, J Thornton, RA Butow

    MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL   13 ( 3 )   795 - 804   2002年3月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER SOC CELL BIOLOGY  

    An important function of the RTG signaling pathway is maintenance of intracellular glutamate supplies in yeast cells with dysfunctional mitochondria. Herein, we report that MKS1 is a negative regulator of the RTG pathway, acting between Rtg2p, a proximal sensor of mitochondrial function, and the bHLH transcription factors Rtg1p and Rtg3p. In mks1Delta cells, RTG target gene expression is constitutive, bypassing the requirement for Rtg2p, and is no longer repressible by glutamate. We show further that Mks1p is a phosphoprotein whose phosphorylation pattern parallels that of Rtg3p in response to activation of the RTG pathway, and that Mks1p is in a complex with Rtg2p. MKS1 was previously implicated in the formation of [URE3], an inactive prion form of a negative regulator of the nitrogen catabolite repression pathway, Ure2p. rtgDelta mutations induce [URE3] and can do so independently of MKS1. We find that glutamate suppresses [URE3] formation, suggesting that the Mks1p effect on the formation of [URE3] can occur indirectly via regulation of the RTG pathway.

    DOI: 10.1091/mbc.01-09-0473

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  • RTG-dependent mitochondria to nucleus signaling is negatively regulated by the seven WD-repeat protein Lst8p 査読

    ZC Liu, T Sekito, CB Epstein, RA Butow

    EMBO JOURNAL   20 ( 24 )   7209 - 7219   2001年12月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL  

    In cells with reduced mitochondrial function, RTG1, 2 and 3 are required for expression of genes involved in glutamate synthesis. Glutamate negatively regulates RTG-dependent gene expression upstream of Rtg2p, which, in turn, acts upstream of the bHLH/Zip transcription factors, Rtg1p and Rtg3p. Here we report that some mutations [lst8-(2-5)] in LST8, an essential gene encoding a seven WD40-repeat protein required for targeting of amino acid permeases (AAPs) to the plasma membrane, bypass the requirement for Rtg2p and abolish glutamate repression of RTG-dependent gene expression. The lst8-1 mutation, however, which reduces plasma membrane expression of AAP, cannot bypass the Rtg2p requirement, but still suppresses glutamate repression of RTG target gene expression. We show that Lst8p negatively regulates RTG gene function, acting at two sites, one upstream of Rtg2p, affecting glutamate repression of RTG-dependent gene expression through Ssy1p, an AAP-like sensor of external amino acids, and the other between Rtg2p and Rtg1p-Rtg3p. These data, together with genome-wide transcription profiling, reveal pathways regulated by glutamate, and provide insight into the regulation of cellular responses to mitochondrial dysfunction.

    DOI: 10.1093/emboj/20.24.7209

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  • Mitochondria-to-nuclear signaling is regulated by the subcellular localization of the transcription factors Rtg1p and Rtg3p 査読

    Takayuki Sekito, Janet Thornton, Ronald, A. Butow

    Molecular Biology of the Cell   11   2103 - 2115   2000年1月

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    掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Cells modulate the expression of nuclear genes in response to changes in the functional state of mitochondria, an interorganelle communication pathway called retrograde regulation. In yeast, expression of the CIT2 gene shows a typical retrograde response in that its expression is dramatically increased in cells with dysfunctional mitochondria, such as in ρ°petites. Three genes control this signaling pathway: RTG1 and RTG3, which encode basic helix-loop-helix leucine zipper transcription factors that bind as heterodimer to the CIT2 upstream activation site, and RTG2, which encodes a protein of unknown function. We show that in respiratory-competent (ρ+) cells in which CIT2 expression is low, Rtg1p and Rtg3p exist as a complex largely in the cytoplasm, and in ρ°petites in which CIT2 expression is high, they exist as a complex predominantly localized in the nucleus. Cytoplasmic Rtg3p is multiply phosphorylated and becomes partially dephosphorylated when localized in the nucleus. Rtg2p, which is cytoplasmic in both ρ+and ρ°cells, is required for the dephosphorylation and nuclear localization of Rtg3p. Interaction of Rtg3p with Rtg1p is required to retain Rtg3p in the cytoplasm of ρ+cells; in the absence of such interaction, nuclear localization and dephosphorylation of Rtg3p is independent of Rtg2p. Our data show that Rtg1p acts as both a positive and negative regulator of the retrograde response and that Rtg2p acts to transduce mitochondrial signals affecting the phosphorylation state and subcellular localization of Rtg3p.

    DOI: 10.1091/mbc.11.6.2103

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  • ミトコンドリアの起源進化(1) 酵母ミトコンドリアゲノムの進化

    北野 広道, 関藤 孝之, 岡本 浩二, 石富 仁志, 吉田 和夫

    Viva origino   24 ( 1 )   92 - 93   1996年3月

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    記述言語:日本語  

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  • The secondary structure and phylogenetic relationship deduced from complete nucleotide sequence of mitochondrial small subunit rRNA in yeast Hansenula wingei 査読

    Kozi Okamoto, Takayuki Sekito, Kazuo Yoshida

    Genes and Genetic Systems   71 ( 2 )   69 - 74   1996年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    We have accomplished the nucleotide sequence of the 1537 bp mitochondrial gene coding for small subunit (SSU) rRNA of yeast Hansenula wingei, and also determined the 5'- and 3'-termini by S1 nuclease mapping. Eight universally conserved (U) elements of the SSU rRNA were identified. Comparison of U regions among five fungal mitochondrial SSU rRNAs shows the striking similarity between H. wingei and Saccharomyces cerevisiae. The construction of the secondary structure revealed a core structure similar to the counterpart of Escherichia coli 16S rRNA. The secondary structure also enabled us to specify seven variable (V) regions differing from those of other mitochondrial SSU rRNAs in size, sequence and possible secondary structure. Molecular phylogenetic evaluation based on U regions of five fungi indicates that mitochondria of H. wingei and S. cerevisiae diverged from the same lineage. This suggests that the evolution of mitochondria-encoded genes does not directly correlate with the alteration of mitochondrial genetic system: genome size, gene organization and codon usage.

    DOI: 10.1266/ggs.71.69

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  • Is the evolution of mitochondrial genes independent from that of the corresponding nuclear genes in fungi? Construction of molecular phylogenetic trees based on mitochondrial small rRNA. 査読

    Yoshida, K, Okamoto, K, Sekito, T

    Nucleic Acids Symp. Ser.   35   275 - 276   1996年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

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  • The distribution of ND genes in yeast mitochondrial genomes and the mitochondrial DNA structure of Pichia membranaefacens.

    H. Kitano, T. Sekito, H. Ishitomi, K. Yoshida

    Nucleic acids symposium series   23 - 24   1995年12月

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    For long time, it has been believed that the yeast mitochondrial (mt) genome lacks NADH dehydrogenase subunit genes which are designated ND genes. However, our complete mtDNA sequencing of yeast Hansenula wingei led us to the first finding of seven mitochondrial ND genes. We investigated the distribution of ND genes in mtDNAs of other yeasts including Pichia membranaefaciens, Yarrowia lypolitica, Candida maltosa, Saccharomyces kluyveri and Saccharomyces exiguus. By Southern hybridization with probes of H. wingei&#039;s ND1, 2 and 5 genes, we detected positive signals on mtDNAs in P. membranaefaciens, Y. lypolitica, and C. maltosa. To confirm this, we cloned and sequenced DNA fragment of ND5 gene in P. membranaefaciens. We have discussed the sequence homology and genome structure.

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  • THE COMPLETE MITOCHONDRIAL-DNA SEQUENCE OF HANSENULA-WINGEI REVEALS NEW CHARACTERISTICS OF YEAST MITOCHONDRIA 査読

    T SEKITO, K OKAMOTO, H KITANO, K YOSHIDA

    CURRENT GENETICS   28 ( 1 )   39 - 53   1995年6月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SPRINGER VERLAG  

    The complete 27 694-bp mitochondrial (mt) DNA sequence of Hansenula wingei, which is a typical budding yeast and contains circular mitochondrial DNA, has been determined. The mt sequence contains genes encoding large and small ribosomal RNAs, 25 tRNAs, three subunits of cytochrome c oxidase (subunits 1, 2 and 3), three subunits of ATPase (subunits 6, 8 and 9), apocytochrome b, seven subunits of NADH dehydrogenase (subunits 1, 2, 3, 4, 4L, 5 and 6), and a ribosomal protein, VAR1. The VAR1 gene is considered to be a typical yeast type. This is consistent with data on DNA and the deduced amino-acid sequence homology comparisons of genes ubiquitous in yeast and fungi. However, we have identified seven genes encoding NADH dehydrogenase subunits, which are not found in other yeast mitochondrial genomes, thus placing the H. wingei mitochondrial genome in a unique position. In addition the H. wingei mitochondrial genome also encodes one tRNA pseudogene and one short unidentified ORF. The genome is compact with only two introns both of which contain an ORF. One intron lies in the large rRNA gene while the other is situated in the cytochrome c oxidase subunit-1 gene. The conserved nonanucleotide motif (A/T)TATAAG (T/A)(A/T), which is a transcription start signal in Saccharomyces cerevisiae mitochondria, has also been found in the H. wingei mitochondrial genome. The codon assignments for ATA and CTN in H. wingei mitochondria are different from those in S. cerevisiae mitochondria. These results indicate a unique and novel structure for the H. wingei mitochondrial genome in terms of characteristics which are typical for both yeast and for filamentous fungi. This is the first complete mt DNA sequence report in yeast.

    DOI: 10.1007/BF00311880

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  • Yeast mapping reports. Clone bank of the mitochondrial genome of yeast Hansenula wingei 査読

    Takayuki Sekito, Kozi Okamoto, Hiromichi Kitano, Kazuo Yoshida

    Yeast   11 ( 13 )   1317 - 1321   1995年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    For sequencing, mitochondrial DNA from Hansenula wingei yeast was digested with various restriction enzymes and the resultant DNA fragments were cloned into a pEMBL phasmid vector. Our clone bank consists of 39 overlapping clones which cover the entire 27 694 bp region of the H. wingei mitochondrial genome. The nucleotide sequence data reported in this paper will appear in the DDBJ, EMBL and GenBank Nucleotide Sequence Database with the following Accession Number: D31785. Copyright © 1995 John Wiley &amp
    Sons Ltd.

    DOI: 10.1002/yea.320111313

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  • Structure and diversity of yeast mitochondrial genomes

    K. Okamoto, T. Sekito, H. Kitano, K. Yoshida

    Tanpakushitsu kakusan koso. Protein, nucleic acid, enzyme   39 ( 10 )   1638 - 1650   1994年8月

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  • The mitochondrial genome of yeast Hansenula wingei encodes NADH dehydrogenase subunit genes ND4L and ND5 査読

    K. Okamoto, T. Sekito, K. Yoshida

    MGG Molecular &amp; General Genetics   243 ( 4 )   473 - 476   1994年7月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:Springer-Verlag  

    Genes homologous to those encoding mitochondrial NADH dehydrogenase subunits ND4L and ND5 in filamentous fungi were identified in the mitochondrial genome of a budding yeast, Hansenula wingei. The structure and expression of these genes were investigated. The H. wingei ND4L gene is 282 by long, and potentially codes for a polypeptide of 94 amino acids. The putative ND4L protein sequence shares about 46% homology with the analogous mitochondrial proteins of filamentous fungi. The H. wingei ND5 gene is 1935 by long, and encodes a 645-residue polypeptide. The derived ND5 protein shares about 38% sequence homology with the analogue in filamentous fungi. The ND4L and ND5 genes have no intervening sequence, and form a gene cluster in the order of 5′-ND4L-ND5-3′. A presumptive mature dicistronic or polycistronic transcript of these genes was detected by Northern blot hybridization. These results strongly indicate that these ND4L and ND5 genes are active. As far as we are aware, this is the first report on the identification of mitochondrially encoded ND genes in yeast. © 1994 Springer-Verlag.

    DOI: 10.1007/BF00280478

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  • Yeast Hansenula wingei mitochondrial genome's complete DNA sequence demonstrated unique characteristics. 査読

    Sekito, T, Okamoto, K, Kitano, H, Yoshida, K

    Nucleic Acids Symp. Ser.   31   233 - 234   1994年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

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  • NUCLEOTIDE-SEQUENCES AND SECONDARY STRUCTURES OF 4 TRANSFER-RNA GENES IN MITOCHONDRIAL-DNA OF HANSENULA-WINGEI YEAST 査読

    T SEKITO, K OKAMOTO, K SUZUKI, K YOSHIDA

    NUCLEIC ACIDS RESEARCH   21 ( 15 )   3589 - 3589   1993年7月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:OXFORD UNIV PRESS UNITED KINGDOM  

    DOI: 10.1093/nar/21.15.3589

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  • 1989年度植物生態学野外実習報告 Miracle Islands〜石垣・西表

    石山 光江, 関藤 孝之, 湯畑 典子

    広島大学生物学会誌   ( 56 )   p25 - 30   1990年12月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:広島大学生物学会  

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書籍等出版物

  • オートファジー 分子メカニズムの理解から病態の解明まで

    関藤 孝之( 担当: 分担執筆 範囲: 第6章 オートファゴソームの内膜分解と分解産物の再利用に機能する分子装置)

    南山堂  2017年12月  ( ISBN:9784525134815

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MISC

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講演・口頭発表等

  • 液胞アミノ酸トランスポーターAvt4相互作用因子の同定

    山本悠介, 佐藤有美香, 石本晶也, 野澤彰, 澤崎達也, 小迫英尊, 関藤孝之

    第62回 日本生化学会 中国・四国支部例会  2021年9月 

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    開催年月日: 2021年9月

    会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 液胞アミノ酸トランスポーターAvt1の窒素飢餓に応答した発現調節

    御供遥, 佐藤明香音, 河田(河野)美幸, 関藤孝之

    第62回 日本生化学会 中国・四国支部例会  2021年9月 

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    開催年月日: 2021年9月

    会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 液胞アミノ酸トランスポーターVsb1による基質輸送について

    大西祥太, 市村悠, 川崎裕美, 関藤孝之, 河田(河野)美幸

    第62回 日本生化学会 中国・四国支部例会  2021年9月 

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    開催年月日: 2021年9月

    会議種別:口頭発表(一般)  

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  • AVT液胞アミノ酸トランスポーターの窒素飢餓に応答した発現調節

    佐藤明香音, 木村匠, 河田(河野)美幸, 関藤孝之

    日本農芸化学会中四国支部第58回講演会  2021年1月 

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    開催年月日: 2021年1月

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  • 出芽酵母における液胞内塩基性アミノ酸蓄積に関与するトランスポーターの機能解析

    市村悠, 大西祥太, 川崎祐美, 山本悠介, 関藤孝之, 河田美幸

    日本農芸化学会中四国支部第58回講演会  2021年1月 

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    開催年月日: 2021年1月

    会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 窒素源に応答したAVT液胞アミノ酸トランスポーターの転写調節

    佐藤明香音, 中津秀介, 木村匠, 村上瑛夢, 兵頭美波, 児玉理美, 河田美幸, 関藤孝之

    第43回日本分子生物学会年会  2020年12月 

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    開催年月日: 2020年12月

    会議種別:ポスター発表  

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  • 塩基性アミノ酸蓄積に関わる出芽酵母液胞トランスポーターの機能解析

    市村悠, 大西祥太, 川崎祐美, 山本悠介, 関藤孝之, 河田美幸

    第43回日本分子生物学会年会  2020年12月 

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    開催年月日: 2020年12月

    会議種別:ポスター発表  

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  • 液胞アミノ酸トランスポーターVsb1による基質輸送について

    大西祥太, 市村悠, 川崎裕美, 関藤孝之, 河田(河野)美幸

    第62回 日本生化学会 中国・四国支部例会  2020年9月 

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    開催年月日: 2020年9月

    会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 液胞膜を介したアミノ酸輸送の分子装置 招待

    関藤孝之, 河田美幸

    第72回 日本生物工学会大会 シンポジウム 「酵母細胞内における最大の貯蔵庫「液胞」が果たす機能の多様性とその応用展開について」  2020年9月 

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    開催年月日: 2020年9月

    会議種別:口頭発表(招待・特別)  

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  • 植物病原菌Fusarium oxysporumにおけるオートファジー関連遺伝子ATG15の機能解析

    久賀夏子, 河田美幸, 関藤孝之, 秋山浩一

    日本農芸化学会中四国支部第56回講演会  2020年1月 

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    開催年月日: 2020年1月

    会議種別:口頭発表(一般)  

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  • Vacuolar amino acid transport is regulated by the GATA transcription factors.

    Sato A, Kimura T, Murakami E, Hyodo M, Kodama S, Kawano-Kawada M, Sekito T

    ASCB|EMBO 2019 meeting  2019年12月 

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    開催年月日: 2019年12月

    会議種別:ポスター発表  

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  • The molecular mechanism underlying growth inhibition of Saccharomyces cerevisiae by supplementing lysine to the medium containing proline as sole nitrogen source

    Ichimura H, Kaneko T, Yamaguchi S, Murao N, Sekito T, Kawano-Kawada M

    ASCB|EMBO 2019 meeting  2019年12月 

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    開催年月日: 2019年12月

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  • 液胞アミノ酸コンパートメンテーションの機構・生理・応用 招待

    関藤孝之, 河田美幸

    第71回日本生物工学会大会  2019年9月 

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    開催年月日: 2019年9月

    会議種別:口頭発表(招待・特別)  

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  • 酵母液胞膜タンパク質Ypq2による塩基性アミノ酸交換輸送について

    河田美幸, 真鍋邦男, 池田紘一, 原田悠希, 田中志穂, 柿沼喜己, 関藤孝之

    日本生体エネルギー研究会第44回討論会  2018年12月 

     詳細を見る

    開催年月日: 2018年12月

    会議種別:ポスター発表  

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  • イネ受容体様キナーゼタンパク質遺伝子(OsRLK)の解析

    植村優樹, 小林括平, 関藤孝之, 原奈穂, 土岐精一, 山岡直人, 西口正通

    日本植物病理学会大会プログラム・講演要旨予稿集  2011年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • オートファジーアミノ酸リサイクルにおける液胞アミノ酸トランスポーターAvt3/Avt4の機能

    関藤孝之, 杉本直子, CHARDWIRIYAPREECHA Soracom, 本藤加奈, 柿沼喜己

    生化学  2011年9月 

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    記述言語:日本語  

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  • 酵母オートファジーに必須な膜タンパク質Atg9の細胞内局在解析

    関藤孝之, 大隅良典

    日本分子生物学会年会プログラム・講演要旨集  2004年11月 

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    記述言語:日本語  

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  • オートファジー Pre-autophagosomal structure形成におけるAtgタンパク質の階層(Hierarchy of Atg proteins in pre-autophagosomal structure organization)

    鈴木 邦律, 久保田 有香, 関藤 孝之, 大隅 良典

    日本発生生物学会・日本細胞生物学会合同大会要旨集  2007年5月 

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    記述言語:英語  

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  • 出芽酵母の新規液胞アミノ酸トランスポーターの性質

    関藤孝之, 大崎真莉子, CHAHOMCHUEN Thippayarat, 本藤加奈, 柿沼喜己

    生化学  2008年 

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    記述言語:日本語  

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  • 酵母液胞アミノ酸トランスポーターの発現と機能解析

    関藤孝之, CHAHOMCHUEN Thippayarat, 柏尾慎二, 井上智弘, 稲田紘子, 柿沼喜己

    日本生体エネルギー研究会討論会講演要旨集  2007年 

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    記述言語:日本語  

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  • オートファジー必須因子Atg9のPAS局在化機構

    関藤孝之, 市川理恵, 柿沼喜巳, 大隅良典

    生化学  2007年 

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    記述言語:日本語  

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  • PI3‐kinase複合体の機能の特異性は細胞内局在によって規定される

    小原圭介, 関藤孝之, 大隅良典

    日本分子生物学会年会講演要旨集  2005年11月 

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    記述言語:日本語  

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  • 酵母液胞塩基性アミノ酸トランスポーターVBAファミリーの機能解析

    秋山浩一, 関藤孝之, 大隅良典, 柿沼喜己

    日本分子生物学会年会講演要旨集  2005年11月 

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    記述言語:日本語  

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  • 液胞アミノ酸トランスポーターホモログをコードする分裂酵母SPBC1685.07遺伝子の解析

    CHARDWIRIYAPREECHA Soracom, 向山博幸, 岩城知子, 関藤孝之, 竹川薫, 柿沼喜己

    日本生体エネルギー研究会討論会講演要旨集  2009年 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母液胞アミノ酸トランスポーターの細胞内局在

    関藤孝之, 本藤加奈, CHAHOMCHUEN Thippayarat, 柿沼喜己

    日本農芸化学会大会講演要旨集  2009年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • 高等植物における液胞アミノ酸トランスポーターの機能的同定

    藤木 友紀, 関藤 孝之, 柏尾 慎治, 大隅 良典, 柿沼 喜己

    日本植物生理学会年会およびシンポジウム 講演要旨集  2008年3月 

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    植物では限られた窒素資源の有効利用のため、細胞間、そして細胞内のアミノ酸輸送は厳密に制御されていると考えられている。細胞膜上のアミノ酸トランスポーターについては、老化、種子形成などで器官間の窒素転流に密接に関与しているとされる。一方、細胞内でのアミノ酸移動に関わる分子(各オルガネラのトランスポーター)の実体は殆ど知られていない。たとえば、液胞内でタンパク分解によって生じたアミノ酸を細胞質へ供給したり、逆に過剰なアミノ酸を液胞に取り込む仕組みなどよく分かっていない。近年の液胞タンパクのプロテオーム解析でもアミノ酸トランスポーターの候補が見つかってはいるが、実際に液胞膜局在、さらにアミノ酸輸送能が証明されたトランスポーターは未だ報告がない。今回我々は、植物から初めて液胞膜アミノ酸トランスポーターを機能的に同定することに成功したので、結果を報告する。<br>出芽酵母Avt3は液胞からの中性アミノ酸の排出を担う輸送体である。シロイヌナズナにも<I>AVT3</I>ホモログ(<I>AtAVT3a</I>)が存在し、植物細胞でも液胞膜局在が観察された。さらに<I>AtAVT3a</I>は酵母<I>avt3 </I>変異体における液胞アミノ酸輸送能の欠損を機能相補できることを確認した。現在、植物個体における液胞膜アミノ酸輸送の生理的意義を明らかにするため、遺伝子破壊株の表現型解析を進めている。

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  • 液胞内アミノ酸のリサイクルにおける液胞アミノ酸トランスポーターの役割

    関藤孝之, 石本晶也, 加藤秀一, 桑原あい, 本藤加奈, 柿沼喜己

    日本生体エネルギー研究会討論会講演要旨集  2009年 

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    記述言語:日本語  

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  • 酵母液胞アミノ酸トランスポーターVbaタンパク質の生理機能解析

    柏尾慎治, 井上仁志, 稲田紘子, 関藤孝之, 柿沼喜己

    生化学  2008年 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母AVT液胞アミノ酸トランスポーターの発現調節

    木村匠, 佐藤明香音, 村上瑛夢, 兵頭美波, 児玉理美, 本藤加奈, 河田美幸, 関藤孝之

    第60回日本生化学会中国・四国支部例会  2019年5月 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 出芽酵母Ypq2アルギニン/ヒスチジン交換輸送活性に対するPQモチーフ変異の影響評価

    原田悠希, 真鍋邦男, 池田紘一, 田中志穂, 佐藤明香音, 河田美幸, 関藤孝之

    第91回日本生化学会大会  2018年9月 

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    会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 酵母液胞膜タンパク質Ypq2による塩基性アミノ酸交換輸送について

    河田美幸, 河田美幸, 真鍋邦男, 池田紘一, 原田悠希, 田中志穂, 柿沼喜己, 関藤孝之

    日本生体エネルギー研究会討論会講演要旨集  2018年12月 

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    記述言語:日本語  

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  • 液胞アミノ酸トランスポーターAvt4の発現とアミノ酸輸送活性の調節

    佐藤明香音, 村上瑛夢, 兵頭美波, 児玉理美, 佐藤有美香, 石本晶也, 河田美幸, 関藤孝之

    酵母遺伝学フォーラム第51回研究報告会  2018年9月 

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    会議種別:ポスター発表  

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  • 塩基性アミノ酸の液胞内蓄積に関与する出芽酵母新規液胞トランスポーター同定の試み

    市村悠, 川崎祐美, 田中志穂, 笠井瑠美, 関藤孝之, 河田美幸

    第91回日本生化学会大会  2018年9月 

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    会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 塩基性アミノ酸輸送に関わる新規液胞膜局在性トランスポーターの探索

    川崎祐美, 市村悠, 田中志穂, 笠井瑠美, 関藤孝之, 河田美幸

    酵母遺伝学フォーラム第51回研究報告会  2018年9月 

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    会議種別:ポスター発表  

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  • 出芽酵母液胞膜タンパク質Ypq2の解析

    田中志穂, 原田悠希, 池田紘一, 真鍋邦男, 河田美幸, 関藤孝之

    酵母遺伝学フォーラム第51回研究報告会  2018年9月 

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    会議種別:ポスター発表  

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  • プロリンを窒素源とした培地におけるアミノ酸の毒性発現機序について

    金子拓磨, 村尾奈美, 山口翔吾, 市村悠, 河田美幸, 関藤孝之

    2019年5月 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • The molecular aspect of amino acid recycling from the yeast vacuole 招待 国際会議

    Takayuki Sekito, Miyuki Kawano-kawada

    JSPS A3 Foresight Program (The 5th Joint Symposium on Autophagy)  2019年6月 

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    記述言語:英語   会議種別:口頭発表(招待・特別)  

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  • 塩基性アミノ酸蓄積に関わる液胞トランスポーターの同定とその機能解析

    大西 祥太, 川崎 裕美, 市村 悠, 関藤 孝之, 河田 美幸

    第61回日本生化学会中国・四国支部例会  2020年5月 

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  • 液胞アミノ酸トランスポーターAvt4の活性調節機構

    山本 悠介, 大槻 華, 佐藤 明香音, 國米 春香, 石本 晶也, 関藤 孝之, 河田 美幸

    第61回日本生化学会中国・四国支部例会  2020年5月 

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  • 液胞アミノ酸トランスポーター発現の窒素飢餓応答

    中津秀介, 木村匠, 佐藤明香音, 村上瑛夢, 兵頭美波, 児玉理美, 本藤加奈, 河田美幸, 関藤孝之

    第61回日本生化学会中国・四国支部例会  2020年5月 

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  • マウスPQループ蛋白質PQLC2の出芽酵母発現系による機能解析

    富阪百花, 河田美幸, 河田美幸, 関藤孝之, 城戸京子, 柿沼喜己

    日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)  2016年 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母液胞膜タンパク質Ypq2とYpq3の機能解析

    池田紘一, 真鍋邦男, 山縣里奈, 河田美幸, 河田美幸, 柿沼喜己, 関藤孝之

    日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)  2016年 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母液胞アルギニン/ヒスチジン交換輸送体の同定

    真鍋邦男, 池田紘一, 中村恭輔, 河田美幸, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本生化学会大会(Web)  2015年12月 

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    記述言語:日本語  

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  • 腸球菌ナトリウム輸送型V‐ATPaseにおけるE50およびV138残基の役割

    河田(河野)美幸, 河田(河野, 美幸, 山地有紀奈, 西谷幸大, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)  2016年 

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    記述言語:日本語  

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  • リジン添加による出芽酵母アミノ酸トランスポーターのエンドサイトーシスを介した生育阻害

    山口翔吾, 村尾奈美, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)  2015年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • 酵母液胞膜を介したアミノ酸輸送〜分子機構とその調節〜 招待

    関藤 孝之

    日本農芸化学会中四国支部第21回若手研究者シンポジウム  2015年10月 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(招待・特別)  

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  • 腸球菌Na+輸送性V-ATPaseの活性に関わるNtpKサブユニットアミノ酸残基の同定

    山地有紀奈, 河田美幸, 西谷幸大, 関藤孝之, 柿沼喜己

    第57回日本生化学会中国・四国支部例会  2016年5月 

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    会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 窒素飢餓条件における出芽酵母液胞アミノ酸トランスポーターAvt6の機能解析

    山下にに子, 山中敦詞, 杉本直子, 宮西遥香, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    第57回日本生化学会中国・四国支部例会  2016年5月 

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    会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 出芽酵母液胞膜タンパク質Ypq3のアミノ酸輸送活性及び発現調節

    池田紘一, 真鍋邦男, 山縣里奈, 河田美幸, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)  2016年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母におけるリジンに応答したTORC1活性の変化

    山口翔吾, 國米春香, 兵頭美波, 村尾奈美, 河田美幸, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)  2016年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • 口腔レンサ球菌におけるナトリウム輸送型V‐ATPaseの同定およびその解析

    山地有紀奈, 川崎祐美, 丸橋優那, 関藤孝之, 河田美幸

    日本生化学会大会(Web)  2017年12月 

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    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • 出芽酵母液胞アミノ酸トランスポーターAvt4の転写/翻訳後段階での活性調節

    村上瑛夢, 兵頭美波, 児玉理美, 佐藤有美香, 石本晶也, 河田美幸, 関藤孝之

    日本生化学会大会(Web)  2017年12月 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母液胞アミノ酸トランスポーターAvt4の合成と合成後における調節について

    村上瑛夢, 杉本航, 兵頭美波, 児玉理美, 佐藤有美香, 石本晶也, 河田美幸, 河田美幸, 関藤孝之

    日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)  2017年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • 液胞膜〜未開のトランスポーターワールドの入り口にて 招待

    関藤 孝之

    日本農芸化学会中四国支部第26回若手研究者シンポジウム「農芸化学の新潮流を探る」  2017年10月 

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    会議種別:口頭発表(招待・特別)  

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  • The role of Ypq proteins in the transport of basic amino acids in vacuoles of Saccharomyces cerevisiae 国際会議

    Kawano-Kawada M, Manabe K, Sekito T, Ikeda K, Kakinuma Y

    14th International Congress on Yeasts  2016年9月 

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    記述言語:英語   会議種別:ポスター発表  

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  • 腸球菌ナトリウム輸送性V‐ATPase膜内在性サブユニットの変異体解析

    山地有紀奈, 丸橋優那, 大江怜奈, 西谷幸大, 関藤孝之, 河田美幸, 河田美幸

    日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)  2017年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • Involvement of vacuolar amino acid recycling in sporulation of Saccharomyces cerevisiae 国際会議

    Sekito T, Yamashita N, Yamanaka A, Sugimoto N, Kawano-Kawada M, Kakinuma Y

    14th International Congress on Yeasts  2016年9月 

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    記述言語:英語   会議種別:ポスター発表  

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  • 分裂酵母PQループタンパク質Stm1によるアミノ酸輸送の検討

    上田大資, 津山愛美, 笠井瑠美, 関藤孝之, 河田美幸

    酵母遺伝学フォーラム第51回研究報告会  2018年9月 

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    会議種別:ポスター発表  

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  • Mks1p ミトコンドリアから核へのシグナル伝達系と[URE3]プリオン形成の接点

    関藤孝之, LIU Z, THORNTON J, BUTOW R

    日本細胞生物学会大会講演要旨集  2001年 

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    記述言語:日本語  

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  • 酵母オートファジーにおけるAVT液胞アミノ酸トランスポーターファミリーの役割

    関藤孝之, 石本晶也, 加藤秀一, 桑原あい, 本藤加奈, 柿沼喜己

    生化学  2009年9月 

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    記述言語:日本語  

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  • イオノフォア様活性を有する四置換テトラヒドロフラン型リグナンの構造活性相関

    秋山浩一, 山内聡, 西脇寿, 菅原卓也, 岸田太郎, 関藤孝之, 丸山雅史, 柿沼喜己

    日本農芸化学会関西支部講演会講演要旨集  2009年10月 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母液胞アミノ酸トランスポーターVbaタンパク質の解析

    柏尾慎治, 稲田紘子, 秋山浩一, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本農芸化学会大会講演要旨集  2009年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母液胞VBAアミノ酸トランスポーターの発現変動とその生理機能解析

    関藤孝之, 安藤竜弥, 坂村慧, 秋山浩一, 柿沼喜己

    生化学  2009年9月 

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    記述言語:日本語  

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  • 酵母ミトコンドリアゲノム構造と遺伝子の核移行

    吉田和夫, 上地克行, 関藤孝之, 北野広道

    日本遺伝学会大会プログラム・予稿集  1995年10月 

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    記述言語:日本語  

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  • 酵母H.wingeiミトコンドリアゲノムの全構造決定

    岡本浩二, 関藤孝之, 北野広道, 吉田和夫

    日本分子生物学会年会プログラム・講演要旨集  1993年11月 

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    記述言語:日本語  

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  • 酵母ミトコンドリアゲノム構造とND遺伝子分布

    吉田 和夫, 関藤 孝之, 北野 広道, 岡本 浩二, 石富 浩

    日本植物学会大会研究発表記録 = Proceedings of the annual meeting of the Botanical Society of Japan  1995年9月 

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    記述言語:日本語  

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  • 酵母液胞アミノ酸トランスポーター遺伝子の同定とその性質

    秋山浩一, 関藤孝之, 大隅良典, 柿沼喜己

    日本分子生物学会年会プログラム・講演要旨集  2004年11月 

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    記述言語:日本語  

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  • 酵母オートファジーに必須な膜タンパクAtg9のN/C末端親水性領域の機能

    関藤孝之, 市川理恵, 大隅良典

    日本分子生物学会年会講演要旨集  2005年11月 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母の液胞アミノ酸排出系Avt3/Avt4の性質

    関藤孝之, 阪村慧, CHARDWIRIYAPREECHA Soracom, 杉本直子, 石本晶也, 柿沼喜己

    日本生体エネルギー研究会討論会講演要旨集  2010年 

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    記述言語:日本語  

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  • 分裂酵母PQループファミリーStm1の細胞内局在とアミノ酸輸送活性について

    上田大資, 津山愛美, 笠井瑠美, 関藤孝之, 河田美幸

    日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)  2018年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • コリネ菌リジントランスポーターLysE組換えタンパク質の大腸菌発現系の構築

    秋山浩一, 関藤孝之, 河田美幸, 柿沼喜己

    日本農芸化学会西日本支部大会およびシンポジウム講演要旨集  2011年9月 

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    記述言語:日本語  

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  • 液胞アミノ酸トランスポーターAvt4の発現調節とN末端親水性領域を介した活性調節について

    佐藤明香音, 村上瑛夢, 兵頭美波, 児玉理美, 佐藤有美香, 石本晶也, 河田美幸, 関藤孝之

    日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)  2018年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母液胞アミノ酸トランスポーターAvt1の性質について

    刀根潤一, 吉村鮎美, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本生化学会大会(Web)  2012年12月 

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    記述言語:日本語  

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  • N末端親水性領域を欠損した変異型液胞アミノ酸トランスポーターAvt4の解析

    石本晶也, 佐藤有美香, 本藤加奈, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本生化学会大会(Web)  2012年12月 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母新規液胞アミノ酸トランスポーター遺伝子の同定

    森實大貴, 杉本直子, 本藤加奈, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)  2012年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • プロベナゾール誘導性イネ受容体様キナーゼタンパク質遺伝子(PRLK)の解析

    西口正通, 植村優樹, 小林括平, 関藤孝之, 原菜穂, 土岐精一, 山岡直人

    日本植物病理学会大会プログラム・講演要旨予稿集  2012年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母液胞アミノ酸トランスポーターAvt6サブファミリーの解析

    刀根潤一, 杉本直子, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本生化学会大会(Web)  2013年9月 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • A vacuolar transporter Avt3 of Schizosaccharomyces pombe is involved in spore formation and excretion of amino acids from vacuole. 国際会議

    Miyuki Kawano-Kawada, Soracom Chardwiriyapreecha, Kunio Manabe, Tomoko Iwaki, Takayuki Sekito, Koichi Akiyama, Kaoru Takegawa, Yoshimi Kakinuma

    26th International Conference on Yeast Genetics and Molecular Biology  2013年9月 

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    記述言語:英語  

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  • 出芽酵母液胞アミノ酸トランスポーターAvt6とそのホモログの解析

    刀根 潤一, 杉本 直子, 河田 美幸, 関藤 孝之, 柿沼 喜己

    第54回日本生化学会 中国・四国支部例会  2013年5月 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 出芽酵母オートファジーに関わるAtg15の機能解析

    加藤 千晴, 新名 沙和, 刀根 潤一, 河田 美幸, 関藤 孝之, 柿沼 喜己

    第54回日本生化学会 中国・四国支部例会  2013年7月 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 出芽酵母液胞膜VBAトランスポーターの機能解析

    安田 麻祐, 河田 美幸, 関藤 孝之, 柿沼 喜己

    第54回日本生化学会 中国・四国支部例会  2013年5月 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 出芽酵母液胞アミノ酸トランスポーターAvt4N末端親水性領域における保存配列の機能解析

    佐藤 有美香, 石本 晶也, 本藤 加奈, 河田 美幸, 関藤 孝之, 柿沼 喜己

    第54回日本生化学会 中国・四国支部例会  2013年5月 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • リジン添加による出芽酵母生育阻害に伴う細胞内アミノ酸組成の変化とその分子機構

    村尾奈美, 山口翔吾, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)  2014年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • Characterization of the N-terminal hydrophilic region of a vacuolar amino acid transporter Avt4p in Saccharomyces cerevisiae

    Takayuki Sekito, Masaya Ishimoto, Yumika Sato, Nami Murao, Kana Hondo, Miyuki Kawano-Kawada, Yoshimi Kakinuma

    32nd Small Meeting on Yeast Transport and Energetics  2014年8月 

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    記述言語:英語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • Analysis of AVT6 subfamily in AVT vacuolar amino acid transporter family in Saccharomyces cerevisiae 国際会議

    Junichi Tone, Naoko Sugimoto, Miyuki Kawano-Kawada, Takayuki Sekito, Yoshimi Kakinuma

    26th International Conference on Yeast Genetics and Molecular Biology  2013年9月 

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    記述言語:英語   会議種別:ポスター発表  

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  • 出芽酵母胞子形成過程における液胞アミノ酸リサイクルの役割について

    山中敦詞, 刀根潤一, 杉本直子, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)  2014年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • The role of conserved five motifs in the N-terminal hydrophilic region of vacuolar amino acid transporter Avt4 国際会議

    Masaya Ishimoto, Yumika Sato, Kana Hondo, Miyuki Kawano-Kawada, Takayuki Sekito, Yoshimi Kakinuma

    26th International Conference on Yeast Genetics and Molecular Biology  2013年9月 

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    記述言語:英語   会議種別:ポスター発表  

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  • 出芽酵母Ypq1,Ypq2,Ypq3は液胞塩基性アミノ酸輸送に関与する

    真鍋邦男, 村尾奈美, 中村恭輔, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)  2015年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母における液胞塩基性アミノ酸輸送の分子機構

    真鍋邦男, 村尾奈美, 中村恭輔, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本生体エネルギー研究会討論会講演要旨集  2014年12月 

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    記述言語:日本語  

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  • リジン添加による出芽酵母生育阻害へのTORC1の関与について

    山口翔吾, 村尾奈美, 國米春香, 河田美幸, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本生化学会大会(Web)  2015年 

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    記述言語:日本語  

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  • Saccharomyces cerevisiae YPQ genes are involved in vacuolar transport of basic amino acids

    Kunio Manabe, Nami Murao, Kyosuke Nakamura, Miyuki Kawano-Kawada, Takayuki Sekito, Yoshimi Kakinuma

    32nd Small Meeting on Yeast Transport and Energetics  2014年8月 

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    記述言語:英語   会議種別:ポスター発表  

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  • 出芽酵母液胞アミノ酸トランスポーターAvt4欠損株のリジンによる生育阻害機構

    村尾奈美, 山口翔吾, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本生体エネルギー研究会討論会講演要旨集  2014年12月 

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    記述言語:日本語  

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  • イネ受容体様キナーゼタンパク質遺伝子の解析:形質転換イネにおける防御反応

    植村優樹, 小林括平, 関藤孝之, 原菜穂, 土岐精一, 山岡直人, 西口正通

    日本植物病理学会報  2011年2月 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母におけるオートファジーアミノ酸リサイクル機構

    関藤孝之, 阪村慧, 石本昌也, CHARDWIRIYAPREECHA Soracom, 本藤加奈, 柿沼喜己

    日本農芸化学会大会講演要旨集  2011年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母アミノ酸トランスポーターVba5pの機能解析

    板谷旭洋, 島津昌光, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本農芸化学会北海道支部講演会講演要旨  2011年 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母液胞アミノ酸トランスポーターAvt1は広い基質特異性を有する

    刀根潤一, 吉村鮎美, 河田美幸, 関藤孝之, 柿沼喜己

    日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)  2012年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • トリブチルスズ耐性に関与する分裂酵母ABCトランスポーター遺伝子の同定

    秋山浩一, 櫻井康雄, 関藤孝之, 河田美幸, 柿沼喜己

    日本農芸化学会中四国支部講演会講演要旨集  2012年1月 

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    記述言語:日本語  

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  • 出芽酵母における分裂酵母液胞アミノ酸トランスポーターFnx1の機能発現

    真鍋邦男, CHARDWIRIYAPREECHA Soracom, 河田美幸, 秋山浩一, 関藤孝之, 竹川薫, 柿沼喜己

    日本農芸化学会大会講演要旨集(Web)  2012年3月 

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    記述言語:日本語  

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  • シロイヌナズナatg変異体における老化プロセスと液胞アミノ酸トランスポーターの働き

    藤木友紀, 関藤孝之, 柿沼喜巳, 大隅良典, 西田生郎

    日本植物細胞分子生物学会大会・シンポジウム講演要旨集  2011年9月 

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    記述言語:日本語  

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受賞

  • Molecular Biology of the Cell 年間論文賞

    2001年12月   アメリカ細胞生物学会  

    関藤 孝之

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共同研究・競争的資金等の研究課題

  • アミノ酸リサイクルによるオートファジー活性のファインチューニング

    2022年4月 - 2024年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業  新学術領域研究(研究領域提案型)

    関藤 孝之

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    配分額:5850000円 ( 直接経費:4500000円 、 間接経費:1350000円 )

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  • 排出系液胞アミノ酸トランスポーターAvt4の調節と生理機能に関する研究

    2021年4月 - 2024年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業  基盤研究(C)

    関藤 孝之

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    配分額:4160000円 ( 直接経費:3200000円 、 間接経費:960000円 )

    ・近位依存性ビオチン化タグAirIDを付加した液胞アミノ酸トランスポーターAvt4を発現する細胞をビオチン添加培地で培養し、ビオチン化ペプチドを質量分析によって同定したところ、液胞膜局在性のタンパク質やTORC1関連のタンパク質のビオチン化が検出された。TORC1関連遺伝子破壊株のウエスタンブロット解析においてAvt4のリン酸化状態の変化を検出したことからAvt4がTORC1下流で調節される可能性が示唆され、結果を学会にて発表した。
    ・Avt4とは逆向きに、Avt1はアミノ酸を液胞内に取り込むにも関わらず、Avt4同様、飢餓条件でGATA因子依存的に発現が誘導されることを見出した。さらにクロマチン免疫沈降実験によりGATA転写因子が直接的にAVT1の転写を調節することが示唆された。またAvt1タンパク質レベルもGATA転写因子依存的に増加しており、これらAvt1の細胞内レベルの調節について結果をまとめ学会で報告した。最近、Avt1が細胞中のアミノ酸ストレスの緩和に働くことで細胞寿命に寄与する可能性が報告され、Avt1の発現誘導との関係性について現在解析を進めている。
    ・出芽酵母の新規液胞アミノ酸トランスポーターとして当研究室が報告したVsb1の分裂酵母ホモログSpVsb1の液胞膜局在を明らかにし、その遺伝子破壊および過剰発現による液胞内塩基性アミノ酸含量の変化を検出することにより、機能的にも保存されていることを明らかにした。さらに、出芽酵母Vsb1において液胞内への塩基性アミノ酸蓄積に必須な保存アスパラギン酸残基(D223)に相当するSpVsb1のD174のアラニン置換が分裂酵母液胞内の塩基性アミノ酸含量を著しく低下させたことから、種を越えてアミノ酸輸送に関わる重要アミノ酸残基であることが示唆され、これら結果をまとめて論文発表した。

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  • 液胞アミノ酸排出機構解明によるオートファジーアミノ酸リサイクルの生理的意義の検討

    2018年4月 - 2021年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業  基盤研究(C)

    関藤 孝之

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    配分額:4420000円 ( 直接経費:3400000円 、 間接経費:1020000円 )

    液胞膜でアルギニン/ヒスチジン交換輸送を行うYpq2と、プロトン濃度勾配依存的な塩基性アミノ酸取り込みに関与するVsb1を同定した。また、Ypq2の分裂酵母ホモログStm1が液胞膜を介したアミノ酸輸送に関与し、機能的にも保存されていることを報告した。さらにアミノ酸を液胞外へ排出するトランスポーターAvt4とAvt6の発現がGATA転写因子によって転写レベルで直接的に制御されることを明らかにした。GATA転写因子は窒素源の変化に対するアミノ酸代謝の適応応答で中心的な役割を担う。その直接的な標的であることから細胞内アミノ酸恒常性への寄与が液胞アミノ酸輸送の生理機能の一つであることが強く示唆された。

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  • 液胞アミノ酸リサイクルシステムの調節機構解明

    2015年4月 - 2018年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業  基盤研究(C)

    関藤 孝之, 柿沼 喜己, 河田 美幸

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    配分額:4940000円 ( 直接経費:3800000円 、 間接経費:1140000円 )

    出芽酵母液胞アミノ酸トランスポーターAvt4の活性調節において窒素飢餓条件での発現誘導に転写因子Gln3とGat1が転写段階で重複して機能することと、栄養豊富条件ではAvt4のN末端親水性領域が翻訳後段階で抑制的に作用することを見出した。並行してシロイヌナズナ、分裂酵母、フザリウム菌のAvt4ホモログの解析も進め、これらが機能的にも保存され、液胞からのアミノ酸排出に機能することを報告した。さらにPQループタンパク質Ypq3がヒスチジン輸送活性を有する新規液胞アミノ酸トランスポーターであることを明らかにした。
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  • オートファジーによるRNA分解の分子機構とその普遍性の解明

    2015年4月 - 2018年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業  基盤研究(C)

    堀江 朋子, 関藤 孝之, 大隅 良典

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    配分額:5070000円 ( 直接経費:3900000円 、 間接経費:1170000円 )

    オートファジーは細胞内の分解システムであり、タンパク質、核酸(主としてRNA)、脂質分解を担う。オートファジーは一般的には非選択的であるが、選択的に分解される基質タンパク質が同定されている。RNAも同様に基質選択性があるかどうかを調べることにした。その結果、ある種のRNAについて、基質選択性があることが明らかになった。本課題ではまた、オートファジーによるRNA分解の結果生じるRNA分解代謝物の輸送の実態の解明を試みた。液胞膜に局在するヌクレオシド輸送体候補としてFun26を同定しているが、これ以外にも輸送体が存在する可能性が示唆された。

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  • 液胞アミノ燦排出トランスポーターの構造と機能制御機構に関する研究

    2015年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業  基盤研究(B)

    柿沼 喜己, 河田 美幸, 関藤 孝之, 秋山 浩一

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    配分額:6630000円 ( 直接経費:5100000円 、 間接経費:1530000円 )

    出芽酵母液胞アミノ酸トランスポーターAvt4のプロテオリポソーム再構成および構造解析に向けてコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系により全長タンパク質と膜貫通領域の高効率な合成を達成できた。現在、輸送活性の速度論的な解析に向け、リポソームへの再構成条件を検討中である。Avt4活性調節へのリン酸化の関与についてはN末端親水性領域の保存セリン/トレオニン/チロシン残基および、他の研究グループの網羅的リン酸化ペプチド解析によって報告された推定リン酸化部位へのアラニン置換変異導入により部分的なアミノ酸輸送活性の増加を検出した。また我々がAvt4の相互作用タンパク質として同定したBmh1について、Avt4のリン酸化によって同親水性領域とBmh1との相互作用が増加すること、ホモログであるBmh2との二重欠損によって液胞内中性/塩基性アミノ酸含量が大幅に減少することを見出した。よってBmh1/2がリン酸化Avt4との相互作用を介してアミノ酸輸送活性を負に調節することが示唆された。酵母遺伝子破壊株ライブラリーを使用したAvt4のリン酸化酵素同定に向けたスクリーニングでは非必須リン酸化酵素の単一破壊によるAvt4リン酸化状態の顕著な変化を検出できなかったことから、生育に必須なリン酸化酵素の関与やリン酸化酵素の多重破壊による影響を検討する必要性が示された。一方で脱リン酸化酵素であるSit4を欠損すると窒素飢餓条件でのAvt4の脱リン酸化が顕著に遅延し、液胞内アミノ酸含量の低下が抑えられたことから、Sit4がAvt4のアミノ酸輸送活性に負に作用することが示唆された。同時にSit4欠損株ではAvt4の細胞内レベルも低下したことから発現調節への関与についても並行して解析を進めている。また、シロイヌナズナ、植物病原菌フザリウムおよび分裂酵母のAvt4ホモログが各生物種において液胞膜に局在することを明らかにした。いずれも出芽酵母に発現させると液胞膜へと局在し、単離液胞膜小胞のATP依存的アミノ酸排出活性の増加を検出したことから、これらホモログは機能的にも保存されていることが示唆された。

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  • 液胞アミノ酸プールの形成機構と生理機能の解明

    2009年 - 2011年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業  基盤研究(C)

    関藤 孝之, 藤木 友紀, 柿沼 喜己

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    配分額:4680000円 ( 直接経費:3600000円 、 間接経費:1080000円 )

    酵母AVTトランスポーターファミリーのAvt3およびAvt4が中性アミノ酸全般の排出に機能し、Avt4はさらに塩基性アミノ酸排出にも機能することが示唆された。一方Avt1は中性アミノ酸全般とヒスチジンの取り込みに機能することが新たに明らかとなった。機能未知トランスポーターの網羅的局在解析より13種の新規液胞膜局在性トランスポーターを同定し、このうち数種が液胞膜を介したアミノ酸輸送に関与する可能性が示された。

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  • オートファジー必須因子が局在する新規膜構造の機能解析

    2006年 - 2007年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業  若手研究(B)

    関藤 孝之

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    配分額:3700000円 ( 直接経費:3700000円 )

    オートファジーは窒素飢餓に応答して誘導され、細胞質タンパク質を非特異的に二重膜小胞(オートファゴソーム:AP)に取り込み、液胞へと輸送後、分解する。分解産物であるアミノ酸の再利用は、窒素飢餓条件での生存維持に必須である。酵母においてオートファジーに必須なAtgタンパク質の多くは液胞近傍のドット状構造であるPAS(pre-autophagosomal structure)に局在し、AP形成を行っている。Atg9は膜貫通型タンパク質であり、その細胞内挙動の理解はAPへの膜供給機構を解明する上で重要と考えられる。前年度にオートファジー誘導にはAtg17依存的なAtg9のPAS局在が必要であることを示したのに続き、本年度はAtg1がAtg9のAtg17依存的PAS局在に必須であることを見出した。Atg1はタンパク質キナーゼであり、そのキナーゼ活性のオートファジーへの必要性が議論となっている。キナーゼ活性をもたない変異型Atg1(Atg1^<KD>)を発現する細胞ではAtg17依存的なAtg9のPAS局在は阻害されず、逆にPASに高度に蓄積していることを見出した。このことからAtg1のキナーゼ活性はAtg9のPASから細胞質へのリリースに必要であると考えた。これまでAtg2がこのプロセスに必要であることが示されているが、Atg2のPAS局在がAtg1^<KD>発現細胞では阻害されていることが明らかとなり、Atg1のキナーゼ活性はオートファジーに必要との結論を得た。

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